Page 64 - 《中国药房》2022年2期
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效液相色谱法为手段，建立 21 批蛇床子药材的指纹图                          甲醇制成每1 mL含花椒毒素10 µg、佛手柑内酯5 µg、欧
        谱，并进行相似度评价和系统聚类分析，结合一测多评                            前胡素35 µg、蛇床子素35 µg的混合对照品溶液。
        法，以常见、易得的蛇床子素为内参物，同时测定蛇床子                           2.2.2  供试品溶液的制备         取蛇床子药材粉末（过三号
        药材中佛手柑内酯、花椒毒素、欧前胡素的含量，旨在为                           筛，下同）约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
        提高蛇床子药材质量标准提供参考。                                    80％甲醇 20 mL，密塞，称定质量，超声（功率 300 W，频
        1 材料                                                率 50 kHz）处理 30 min，放冷，再次称定质量，用 80％甲
        1.1 主要仪器                                            醇补足减失的质量，摇匀，用 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取
            本研究所用主要仪器包括H-Class型超高效液相色                       续滤液，即得。
        谱仪（美国Waters公司），Vanquish型超高效液相色谱仪                    2.3 指纹图谱的建立
        （美国 Thermo Fisher Scientific 公司），1290 型超高效液         2.3.1  精密度试验      取蛇床子药材（编号 S8）供试品溶
        相色谱仪（美国 Agilent 公司），ME204E 型万分之一天                   液，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，以蛇床子
        平、XP26型百万分之一天平[梅特勒-托利多（中国）有限                        素峰为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面
        公司]，HWS-28 型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器                        积。结果，10 个共有峰相对保留时间和相对峰面积的
        有限公司）等。                                             RSD 分别为 0.05％～0.25％、0.08％～0.61％（n＝6），均
        1.2 主要药品与试剂                                         小于3.0％，表明该方法精密度良好。
            花椒毒素对照品（批号 17111503，纯度 98％）、佛手                  2.3.2  重复性试验       取同批次蛇床子药材粉末（编号
        柑内酯对照品（批号17120501，纯度98％）均购自成都普                      S8）6 份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按
        菲 德 生 物 技 术 有 限 公 司 ；欧 前 胡 素 对 照 品（批 号             “2.1”项下色谱条件进样测定，以蛇床子素峰为参照，计
        110826-201616，纯度 99.6％）、蛇床子素对照品（批号                  算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，10个
        110822-201710，纯度 99.5％）均购自中国食品药品检定                  共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为
        研究院；实验用乙醇（分析纯）、甲醇（分析纯）均购自西陇                         0.08％～0.36％、0.23％～2.35％（n＝6），均小于 3.0％，
        科技股份有限公司；液相用甲醇为色谱级，水为超纯水。
                                                            表明该方法重复性良好。
            21批蛇床子药材分别采集自我国江苏、山东、河南、
                                                            2.3.3  稳定性试验      取蛇床子药材（编号 S8）供试品溶
        湖北、黑龙江等地，经广东一方制药有限公司魏梅主任
                                                            液，分别在室温下放置 0、2、4、6、8、10、12 h 时按“2.1”项
        中药师鉴定，均为伞形科植物蛇床C. monnieri（L.）Cuss.
                                                            下色谱条件进样测定，以蛇床子素峰为参照，计算各共
        的干燥成熟果实，其产地信息详见表1。
                                                            有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，10个共有峰
                  表1    21批蛇床子药材产地信息
                                                            相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为 0.05％～
         编号     批号        产地     编号     批号       产地         0.36％、0.27％～1.58％（n＝7），均小于 3.0％，说明供试
         S1    G1706141  江苏省徐州市  S12   G1712162  山东省滨州市
         S2    G1706142  江苏省徐州市  S13   G1712150  河南省南阳市     品溶液在室温下放置12 h内稳定性良好。
         S3    G1706143  江苏省徐州市  S14   G1712158  河南省南阳市     2.3.4  指纹图谱的建立及相似度评价               取 21 批蛇床子
         S4    G1712145  江苏省盐城市  S15   G1712160  河南省南阳市     药材粉末，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”
         S5    G1712148  江苏省盐城市  S16   G1712151  湖北省宜昌市
         S6    G1712149  江苏省盐城市  S17   G1712153  湖北省宜昌市     项下色谱条件进样分析，记录色谱图。采用《中药色谱
         S7    G1712152  山东省日照市  S18   G1712156  湖北省宜昌市     指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，以S8样品图谱为
         S8    G1712157  山东省日照市  S19   G2104599  黑龙江省哈尔滨市   参照进行保留时间校正和全峰匹配。结果显示，21批蛇
         S9    G1712161  山东省日照市  S20   G2104600  黑龙江省哈尔滨市   床子药材指纹图谱中共有 10 个共有峰（图 1）。以平均
         S10   G1712147  山东省滨州市  S21   G2104601  黑龙江省哈尔滨市
         S11   G1712159  山东省滨州市                             数法生成蛇床子药材对照指纹图谱（图 2）。采用《中药
        2 方法与结果                                             色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》计算 21 批蛇
        2.1 色谱条件                                            床子药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度。结果显
            采用 H-Class 型超高效液相色谱仪，以 YMC Trait                示，21批样品中大多数批次样品（编号S7和S14除外）的
        C18 （2.1 mm×100 mm，1.9 μm）为色谱柱，以甲醇（A）-水             相似度均不低于0.999，详见表2。
        （B）为流动相进行梯度洗脱（0～15 min，39％A→40％A；                   2.3.5  共有峰的指认        查阅文献[3]，在与混合对照品
        15～20 min，40％A→45％A；20～25 min，45％A→60％A；           （同法测定，见图3）比对的同时，结合色谱峰的紫外吸收
        25～30 min，60％A→80％A；30～34 min，80％A）；流速为             光谱对10个共有峰进行指认，共指认了4个共有峰，即峰
        0.20 mL/min；柱温为 30 ℃；指纹图谱检测波长为 310                  4为花椒毒素、峰8为佛手柑内酯、峰9为欧前胡素、峰10
        nm，定量分析检测波长为248 nm；进样量为1 μL。                        为蛇床子素。
        2.2  溶液的制备                                          2.4 系统聚类分析
        2.2.1  混合对照品溶液的制备            分别取花椒毒素、佛手                 以10个共有峰峰面积为变量，采用组间连接法进行
        柑内酯、欧前胡素、蛇床子素对照品适量，精密称定，加                           系统聚类分析，设欧氏距离为 20，采用 Z 得分法对数据


        ·186 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 2                                    中国药房    2022年第33卷第2期
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