Page 71 - 《中国药房》2022年1期
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肺动脉高压是一类以肺动脉重构为特征的进展性                          馏水。
        心肺血管恶性疾病，其发病机制目前尚未完全阐明，但                           1.3 实验动物
        肺血管重构及肺动脉血流动力学的改变是肺动脉高压                                雄性清洁级 SD 大鼠共 100 只由重庆医科大学动物
                                 [1]
        发病中重要的病理生理过程 。有研究显示，肺动脉高                           实验中心提供，平均 8～10 周龄，体质量 200～250 g，于
                                                 +
                          +
        压患者肺血管中CD4 T淋巴细胞表达升高，CD4 T淋巴                       温度22～25 ℃、湿度40％～60％环境中适应性喂养，自
        细胞在肺动脉高压中发挥作用的主要途径之一为分泌                            由摄食饮水。动物合格证号：SYXK（渝）2018-0003。
        各类细胞因子，如白细胞介素 6（interleukin 6，IL-6）、               2 方法
                                                 +
        IL-10、IL-17等 [2－3] 。其中，IL-17主要分泌自CD4 T淋巴           2.1 分组及给药、造模
        细胞。已有研究表明，IL-17 表达水平可影响肺动脉高                            分组：将 100 只 SD 大鼠随机分为正常对照组、野百
        压疾病的发展：上调IL-17的表达能促进该疾病的发展，                        合碱组、黄芪多糖低剂量组和黄芪多糖高剂量组，每组
        下调IL-17的表达能减缓该疾病的发展并能改善肺血管                         25只。分组后所有实验动物的饲养目标周期为28 d，考
        的重塑   [4－5] 。而黄芪多糖可提高体细胞免疫功能，增强T                   虑本实验大鼠饲养过程中可能出现死亡或者造模失败
                                   +
        淋巴细胞活性，并且可以对CD4 T淋巴细胞及其分泌的                         等因素，将 25 只大鼠按照 1～25 进行编号，到饲养目标
        细胞因子起调节作用         [6－7] ；且黄芪多糖有降压作用，能不             周期后每组随机抽取15只大鼠进行研究。
        同程度地促进血管内皮细胞游走与增殖，有利于血管生                               参考文献[12－16]，通过一次性腹腔注射野百合碱
        成 [8－9] ，但目前黄芪多糖对肺动脉高压影响的研究很                       （60 mg/kg）诱导大鼠肺动脉高压。将野百合碱结晶溶解
        少 [10－11] 。本研究主要探讨黄芪多糖通过调节IL-17的表                  在 0.5 mmol/L HCl 溶液中，再用 0.5 mmol/L NaHCO3溶
        达对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的减缓作用，并探讨                           液调节至pH为7.4的溶液。给药：野百合碱组（造模组）
        其可能机制，以期为黄芪多糖治疗肺动脉高压的临床研                           大鼠在分组第 1 天腹腔单次注射野百合碱（60 mg/kg）；
        究提供一定的动物实验基础。                                      将注射用黄芪多糖 0.25 g 溶解在 10 mL 生理盐水中，根
        1 材料                                               据预实验设计了两种干预剂量，即低剂量（200 mg/kg）和
        1.1  主要仪器                                          高剂量（400 mg/kg）。黄芪多糖低剂量组大鼠在分组第
            ChemiDoc XRS+型全自动凝胶成像系统、Power-                 1天腹腔单次注射野百合碱（60 mg/kg），然后在第2～28
        Pac HC 电泳仪购自美国 Bio-Rad 公司；CX31 型光学显                天腹腔注射黄芪多糖 200 mg/kg，每日 1 次；黄芪多糖高
        微镜购自日本Olympus公司；DYY-Ⅲ-6B 型稳压稳流电                    剂量组大鼠在分组第 1 天腹腔单次注射野百合碱 60
        泳仪购自北京六一仪器厂；DU640型紫外分光光度计购                         mg/kg，然后在第2～28天腹腔注射黄芪多糖400 mg/kg，
        自美国Beckman Coulter公司。                              每日 1 次；正常对照组大鼠在第 2～28 天腹腔注射等体
        1.2  主要药品与试剂                                       积生理盐水，每日1次。所有实验组大鼠给药后饲养目
            野百合碱（批号 C2401-1G，纯度 99.64％）购自美国                标周期为28 d。
        Sigma 公司；注射用黄芪多糖（国药准字 Z20040086）购                  2.2  大鼠平均肺动脉压的检测
        自天津赛诺制药有限公司；Trizol RNA 提取试剂盒、反                         所有实验大鼠造模及给药 28 d 后腹腔注射 10％水
        转录试剂盒、扩增试剂盒及 DNA Marker（批号分别为                      合氯醛（30 mL/kg）将其充分麻醉，仰卧位固定并充分暴
        D9108A、DRR037A、D334A、DL1000）均购自日本TaKaRa            露游离大鼠右侧颈外静脉，将5F微导管一边接多导生理
        公司；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluores-                 记录仪，另一边从右侧颈外静脉插入至右心房、右心室
        cence quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）引  及肺动脉主干，当记录仪上出现典型压力曲线波时，记
        物由宝生物工程（大连）有限公司合成；UltraPure琼脂糖                     录右室收缩压及肺动脉压，并计算大鼠的平均肺动脉压
       （批号16500500）购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；                      （mean pulmonary artery pressure，mPAP）：mPAP＝1/3×肺
        鼠IL-17单克隆一抗及辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠                         动脉收缩压+2/3×肺动脉舒张压。参考临床常用标准，
        多克隆二抗（批号 sc-374218、sc-2005）均购自美国 Santa             本研究以野百合碱组大鼠较正常对照组大鼠mPAP明显
        Cruz 公 司 ；鼠 β-actin 单 克 隆 一 抗（内 参 ，批 号 bsm-        升高 10 mm Hg（1 mmHg＝0.133 kPa）及以上提示造模
        33036M）购自北京博奥森生物技术有限公司；凯基膜蛋                        成功。
        白提取试剂盒（批号BC3710）购自北京索莱宝科技有限                        2.3 右心肥厚指数的检测
        公司；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲                               参考文献[17－18]，对大鼠的左心室和室间隔（LV+
        液（批号 02432319）购自美国 Thermo Fisher Scientific 公      S）与右心室游离壁（RV）进行分离：沿房室沟剪掉大血
        司；ECL 发光液（批号 WBKLS0100）购自美国 Millipore              管根部和左、右心房，然后沿后室壁间沟分离右心室的
        公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸                           游离壁，用滤纸充分吸干，分别称量 LV+S、RV 的质量，


        中国药房    2022年第33卷第1期                                                China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1  ·65 ·
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