Page 45 - 《中国药房》2022年1期
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本研究利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱 100％B→5％B；26～30 min，5％B），进样量为5 μL，流速
（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术分析大鼠体内的泻白散入 为400 μL/min，柱温为40 ℃。
血成分，以期为阐明泻白散药效物质基础提供依据。 2.1.2 质谱条件 离子源为电喷雾电离源，雾化气压为
1 材料 55 Psi，辅助气压为 55 Psi，气帘气压为 35 Psi，温度为
1.1 主要仪器 550 ℃，喷雾电压为 5 500 V（正离子模式）或－4 000 V
本研究所用主要仪器有 Nexera UHPLC LC-30A 型 （负离子模式），轰击能量为 40 eV，碰撞能差为 20 V；扫
超高效液相色谱仪（日本 Shimadzu 公司）、Triple TOF 描范围质荷比（m/z）为100～1 500。
5600 型高分辨质谱仪（美国 AB Sciex 公司）、Heraeus 2.2 溶液的制备
Fresco17型离心机（美国Thermo Fisher Scientific公司）、 2.2.1 泻白散溶液的制备 称取炒桑白皮30 g、地骨皮
BSA124S-CW 型万分之一电子天平（德国 Sartorius 公 30 g、炒甘草3 g，加入10倍量（mL/g，下同）水，浸泡1 h；
司）、JXFSTPRP-24型研磨仪（上海净信科技有限公司）、 加热回流提取1 h，滤过，再加8倍量水加热回流提取1 h，
D24 UV 型纯水仪（美国 Merck 公司）、YM-080S 型超声 滤过；合并2次滤液，浓缩成质量浓度为2 g/mL（以生药
仪（深圳市方奥微电子有限公司）。 量计）的泻白散溶液。
1.2 主要药品与试剂 2.2.2 供试品溶液的制备 称取 1 g 泻白散样品粉
炒桑白皮（批号 190901）购自亳州京皖饮片有限公 末[取炒桑白皮、地骨皮、炒甘草按 10 ∶ 10 ∶ 1（m/m/m）混
司，地骨皮（批号 191101）购自浙江中医药大学饮片厂， 合，然后打粉即得]，加水至 30 mL，回流提取 1 h，放冷；
炒甘草（批号190704）购自四川中药饮片厂，上述药材经 补足减失质量后，以 3 000 r/min 离心 5 min，过滤；取续
山东省中医药研究院中药资源室林慧彬研究员鉴定为 滤液10 mL，加入甲醇（1∶1，V/V）混匀，静置过夜，以去除
真品。6-姜酚、地骨皮甲素的对照品（批号分别为 杂质；取上清液以 0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得供试品
P19O9F72930、W01N9Z73848，纯度均大于98％）均购自 溶液。
上海源叶生物科技有限公司；甘草素、18β-甘草次酸的 2.2.3 供试品溶液的处理 参考文献[8]方法进行处
对照品（批号分别为 PRF20111303、PRF21013044，纯度 理。取“2.2.2”项下供试品溶液适量，以 12 000 r/min 离
均大于 98％）均购自成都普瑞法科技开发有限公司；绿 心 15 min；取上清液 300 μL，加入 80％甲醇溶液 1 000
原酸、芒柄花苷、刺芒柄花素的对照品（批号分别为 μL，涡旋 30 s，再于冰水浴条件下超声（频率 40 kHz，功
PS000627、PS000671、PS000674，纯度均大于 98％）均购 率 480 W）5 min；置于－20 ℃条件下静置 1 h（以沉淀供
自成都普思生物科技股份有限公司；其余试剂为实验室 试品溶液中的蛋白），以 12 000 r/min 离心 15 min，取上
常用规格，水为纯净水。 清液，以0.2 μm微孔滤膜滤过，然后取适量进样分析。
1.3 动物 2.3 血清样品的采集及处理
本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，雄性，体质量 2.3.1 空白血清、含药血清的采集 将 SD 大鼠适应性
160～200 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司， 喂养 1 周后，随机分为空白组和给药组，每组 10 只。空
动物生产许可证号为 SCXK（京）2016-0006。大鼠饲养 白组大鼠灌胃水，给药组大鼠灌胃“2.2.1”项下制备的泻
于室温25 ℃、相对湿度50％～60％、每12 h明暗交替的 白散溶液，给药体积均为 11.3 mL/kg，每日 2 次，连续
[9]
环境中，均自由摄食、饮水。本研究的动物实验程序均 3 d 。第3天灌胃前，大鼠禁食不禁水12 h，于末次给药
经山东省中医药研究院实验动物福利与伦理委员会批 1.5 h后，腹腔注射1％戊巴比妥钠进行麻醉，然后腹主动
准（批准号为SDZYY20181201005），且实验过程中的所 脉取血；血样于4 ℃条件下以3 000 r/min离心10 min，收
有操作均符合“3R”原则。 集上层血清，并置于液氮中保存备用。
2 方法与结果 2.3.2 空白血清、含药血清的处理 参考文献[10]方法，
2.1 色谱与质谱条件 将血清样品于冰上解冻后涡旋 30 s，取 400 μL 加入 2
2.1.1 色谱条件 色谱柱为UPLC BEH C18 （1.7 μm×2.1 mol/L盐酸溶液40 μL（以沉淀蛋白），涡旋1 min后，静置
μm，100 mm），流动相为0.1％甲酸水溶液（A）-0.1％甲酸 15 min，再重复涡旋、静置步骤4次；加入乙腈1 600 μL，
乙腈溶液（B）（梯度洗脱：0～3.5 min，5％B→15％B； 涡旋 5 min，以 12 000 r/min 离心 5 min；定量吸取上清液
3.5～6 min，15％B →30％B；6～6.5 min，30％B；6.5～ 1 800 μL 置于 5 mL 离心管中，以氮气吹干；残渣加入
12 min，30％B→70％B；12～12.5 min，70％B；12.5～18 80％甲醇溶液 200 μL，涡旋 5 min，以 12 000 r/min 离心
min，70％B→100％B；18～25 min，100％B；25～26 min， 15 min，取上清液进样分析。
中国药房 2022年第33卷第1期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1 ·39 ·
