Page 40 - 《中国药房》2022年1期

12％ A→15％ A；15～40 min，15％ A→30％ A；40～47 图 1；采用中位数法生成对照指纹图谱（R），详见图2。
min，30％A→45％A；47～50 min，45％A→60％A；50～ 2 600
2 500 19
54 min，60％A→70％A；54～60 min，70％A→80％A； 2 400 2 1 5 4 3 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 20 21 22 23 24 25 26 27
2 300
2 200 S16
60～65 min，80％A→90％A；65～70 min，90％A→100％ 2 100 S15
2 000
1 900 S14
A）；流速为 0.2 mL/min；检测波长为 254 nm；柱温为 1 800 S13
1 700
1 600 S12
30 ℃；进样量为2 μL。 1 500 S11
1 400
S10
1 300
2.1.3 供试品溶液的制备 取“2.1.1”项下吴茱萸水提 U/mV 1 200 S9
1 100
1 000 S8
物 1 mL 置于 10 mL 量瓶中，加 50％乙腈溶液定容至刻 900 S7
800
700 S6
度；取定容后的溶液适量，以 13 000 r/min 离心 10 min， 600 S5
500
400 S4
取上清液，以0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试 300 S3
200
100 S2
品溶液。 0 S1
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68
2.1.4 混合对照品溶液的制备 精密称取新绿原酸、绿 t/min
原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、去氢吴茱萸 图1 16批不同产地吴茱萸水提物的UPLC叠加指纹图谱
碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的对照品各适量，加甲醇溶解 8
210
制 成 上 述 成 分 质 量 浓 度 分 别 为 0.120、0.146、0.124、 200
190
180
0.186、0.113、0.116、0.134、0.122、0.128 mg/mL 的混合对 170
160
150
照品溶液。 140
130
2.1.5 精密度试验 取“2.1.3”项下制备的供试品溶液 120 19
110
（S1样品的水提物），按“2.1.2”项下色谱条件连续测定6 U/mV 100
90
80 4 5 9
次，记录色谱图，以19号峰（去氢吴茱萸碱，该峰面积相 70 22
60 3
对较大、出峰时间适中、峰形良好）为参照峰，计算各色 50 10 13 17 18 23
40
30 1 2
谱峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各色谱 20 6 7 11 12 14 21 25
10 15 16 20 24 26 27
峰相对保留时间的RSD均小于0.38％（n＝6）、相对峰面 0
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68
积的 RSD 均小于 2.51％（n＝6），表明该方法精密度 t/min
良好。 图2 吴茱萸水提物样品的对照指纹图谱（R）
2.1.6 重复性试验 取吴茱萸药材（S1 样品）适量，按
2.1.9 共有峰的指认 取“2.1.4”项下混合对照品溶液
“2.1.1”项下方法制备水提物 6 份，然后按“2.1.3”项下方
适量，按“2.1.2”项下色谱条件进样测定，得到如图3所示
法制备供试品溶液，再按“2.1.2”项下色谱条件进样测
的混合对照品溶液色谱图。由图 1 和图 2 可知，16 批不
定，记录色谱图，以19号峰为参照，计算各色谱峰的相对
同产地吴茱萸水提物样品中含有27个共有峰，通过与图
保留时间和相对峰面积。结果显示，各色谱峰相对保留
3 进行比对，指认出其中 9 个成分，分别为新绿原酸（峰
时间的RSD均小于0.37％（n＝6）、相对峰面积的RSD均
5）、绿原酸（峰 9）、隐绿原酸（峰 10）、咖啡酸（峰 12）、芦
小于2.95％（n＝6），表明该方法重复性良好。
丁（峰 16）、金丝桃苷（峰 17）、去氢吴茱萸碱（峰 19）、吴
2.1.7 稳定性试验 取“2.1.3”项下制备的供试品溶液
茱萸碱（峰24）、吴茱萸次碱（峰25）。
（S1 样品的水提物），于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时
分别按“2.1.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，以 12 19
360 17
19号峰为参照峰，计算各色谱峰的相对保留时间和相对 340
320
峰面积。结果显示，各色谱峰相对保留时间的 RSD 均 300
280 16 25
小于 0.56％（n＝6）、相对峰面积的 RSD 均小于 2.89％ 260 9 24
240
（n＝6），表明该供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性 220
200
良好。 U/mV 180 10
160
140 5
2.1.8 16 批不同产地吴茱萸水提物样品的 UPLC 指纹 120
100
图谱生成 分别取16批不同产地吴茱萸药材样品适量， 80
60
按“2.1.1”项下方法制备水提物，然后按“2.1.3”项下方法 40
20
制备供试品溶液，再按“2.1.2”项下色谱条件进样测定， 0
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68
记录色谱图。采用《中药指纹图谱相似度评价系统 t/min
（2012A版）》，以S1样品的色谱图为参照（其色谱峰峰形 5：新绿原酸；9：绿原酸；10：隐绿原酸；12：咖啡酸；16：芦丁；17：金
较好，峰信号强度适中），设置时间窗宽度为 0.1 s，采用 丝桃苷；19：去氢吴茱萸碱；24：吴茱萸碱；25：吴茱萸次碱
多点校正法进行色谱峰匹配生成叠加指纹图谱，详见 图3 混合对照品溶液的色谱图
·34 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1 中国药房 2022年第33卷第1期