Page 39 - 《中国药房》2022年1期

coefficient＞0 and variable importance projection value＞1，and the order of regression coefficient was peak 8＞peak 3＞peak 23＞
peak 2＞peak 7＞peak 4＞peak 12＞peak 9＞peak 19＞peak 5＞peak 17＞peak 26＞peak 10＞peak 15. Peak 8 had the greatest
correlation with in vitro hepatotoxicity，and the corresponding compound of this peak was identified as 6-O-trans caffeoyl gluconic
acid. CONCLUSIONS The in vitro hepatotoxicity of aqueous extract from E. rutaecarpa is the result of multiple component
interaction，among which 6-O-trans caffeoyl gluconic acid shows closest relation with in vitro hepatotoxicity.
KEYWORDS Euodia rutaecarpa；fingerprint；hepatotoxicity；L02 cell；spectrum-toxicity relationship；grey relational analyses；
partial least squares regression analysis

吴 茱 萸 为 芸 香 科 植 物 吴 茱 萸 Euodia rutaecarpa 芦丁、金丝桃苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱
（Juss.）Benth.、石虎 E. rutaecarpa（Juss.）Benth. var. offi- 的 对 照 品（批 号 分 别 为 wkq20010607、wkq19112202、
cinalis （Dode） Huang 或 疏 毛 吴 茱 萸 E. rutaecarpa wkq19120203、wkq20011605、wkq19040913、wkq2003-
（Juss.）Benth. var. bodinieri（Dode）Huang 的干燥近成 0203、wkq19092506、wkq20021404、wkq19040801，纯度
熟果实，其性辛、味苦，有小毒，具有散寒止痛、降逆止 均大于 98％）均购自四川省维克奇生物科技有限公司；
[1]
呕、助阳止泻的功效 。相关研究表明，吴茱萸水提物、 RPMI-1640 培养基（批号 20210607）购自江苏凯基生物
醇提物、挥发油等不同部位或成分群均具有一定毒性， 技术股份有限公司；胎牛血清（批号11011-8611）购自浙
且主要以肝损伤为主 [2－4] 。相关研究发现，不同产地吴 江天杭生物科技股份有限公司；CCK-8 试剂盒（批号
茱萸药材因其基原、生长环境、采收加工、提取方法等因 5130011）购自北京索莱宝科技有限公司；乙腈、磷酸为
素的影响，其化学成分、药理活性等方面有所不同，从而 色谱纯，水为超纯水。
在临床疗效和毒性方面存在一定差异 [5－8] 。谱-效（或谱- 表1 16批吴茱萸药材的来源信息
毒）关系研究是一种定量分析多种成分与生物活性之间 编号 产地 批号 每千粒质量/g 粒径/mm
的方法，可将指纹图谱中多种化学成分的变化与药效/毒 S1 江西樟树市 20200825 20.0 0.41
S2 安徽宣城市 20200912 12.0 0.34
性结果相联系，以阐明中药效应的物质基础 [9－10] 。基于 S3 广西河池市 20200818 23.0 0.42
此，本研究先制备16批不同产地的吴茱萸水提物，并建 S4 贵州都匀市 20200814 5.4 0.22
立该水提物的超高效液相色谱（ultra high performance S5 江西樟树市 20190830 16.0 0.34
S6 湖南怀化市 20190904 16.8 0.34
liquid chromatography，UPLC）指纹图谱，然后结合人正
S7 陕西 20200922 16.8 0.35
常肝细胞L02来评价其肝毒性，再利用灰色关联度法和 S8 四川 20200915 26.4 0.42
偏最小二乘回归分析法进行谱-毒关系分析，以期为吴 S9 浙江金华市 20200820 5.6 0.20
S10 浙江丽水市 20200824 5.6 0.20
茱萸药材肝毒性物质基础的进一步研究提供参考。
S11 广西玉林市 20190919 38.4 0.44
1 材料 S12 四川 20190729 12.8 0.32
1.1 主要仪器 S13 四川 20190928 41.6 0.50
S14 云南大理市 20190902 16.0 0.38
本研究的主要仪器有 Agilent 1290 Infinity Ⅱ型二
S15 浙江杭州市 20190905 16.8 0.35
元泵UPLC仪（美国Agilent公司），CPA225D型十万分之 S16 浙江兰溪市 20190925 24.0 0.43
一电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]， 1.3 细胞
HR1200-ⅡB2型生物安全柜（青岛海尔股份有限公司）， 本研究所用人正常肝细胞 L02 购自上海美轩生物
MCO-18AIC型CO2培养箱（日本Sanyo公司），MULTLS- 科技有限公司。
KAN sky型全波长酶标仪（美国Thermo Fisher Scientific 2 方法与结果
公司），GL6000-DACO150型动态轴向压缩柱系统（成都 2.1 吴茱萸水提物UPLC指纹图谱的建立
格莱精密仪器有限公司），Avance Ⅲ HD500M型超导核 2.1.1 吴茱萸水提物的制备 参考文献[5]方法进行制
磁 共 振 波 谱 仪（德 国 Bruker 公 司），AB SCIEX 5500 备。将吴茱萸药材打粉过二号筛，精密称取药材粉末 2
Qtrap型质谱仪（美国Absciex公司），Milli-Q型超纯水系 g 置于 100 mL 锥形瓶中，加水 40 mL 浸泡 30 min 后，加
统（美国Millipore公司）。 热回流 30 min，抽滤，收集滤液；残渣继续加水 40 mL，
1.2 主要药品与试剂 加热回流 30 min，抽滤。合并 2 次滤液，置于蒸发皿中，
本研究所用的 16 批吴茱萸药材（编号 S1～S16）由 水浴浓缩至浸膏；将浸膏加水溶解，以 10 mL 量瓶定容
课题组在广西玉林药材市场购买，以及在江西、浙江、四 后，即得质量浓度为 0.2 g/mL 的吴茱萸水提物（以生药
川、广西等吴茱萸种植区收集，经广西中医药大学中药 量计）。
鉴定学教研室马雯芳副教授鉴定为芸香科植物吴茱萸 2.1.2 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Waters HSS-T3 C18 （150
E. rutaecarpa（Juss.）Benth.的干燥近成熟果实（药材来 mm×3.0 mm，1.8 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1％磷酸溶液
源信息见表 1）。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、 （B）（梯度洗脱：0～3 min，8％A→12％A；3～15 min，

中国药房 2022年第33卷第1期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1 ·33 ·