Page 26 - 《中国药房》2022年1期
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动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种动脉血管 98％），辛伐他汀片（杭州默沙东制药有限公司，批号
壁的慢性进行性疾病，血管平滑肌细胞（vascular smooth M042689，规格为 20 mg/片），4％多聚甲醛（武汉博士德
muscle cells，VSMC）的增殖、迁移与AS斑块纤维帽及新 生物工程有限公司，批号 11K17B68），苏木精（美国 Sig-
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生血管的生成具有重要联系 。转化生长因子β（trans- ma公司，批号SLBP6815V），伊红（上海蓝季科技发展有
forming growth factor-β，TGF-β）是一类具有多种生物学 限公司，批号 100715），二甲苯（天津市富宇精细化工有
功能的生长因子，可参与调节细胞的生长、增殖、分化和 限公司，批号20150519），二氨基联苯胺（DAB，丹麦丹科
迁移等过程；其不仅可刺激多种细胞因子和炎症介质的 股份有限公司，批号20039541），兔源甘油醛-3-磷酸脱氢
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合成与分泌，还可参与细胞外基质的合成与降解 。而 酶（GAPDH）多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，
在TGF-β家族中，又以TGF-β 1的功能最多、活性最强、分 批号 10494-1-AP），辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免
布最广。Smads 蛋白家族是 TGF-β 1信号转导的主要分 疫球蛋白 G（immunoglobulin G，IgG）二抗、辣根过氧化
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子，介导信号从细胞膜向细胞核的传递 。近年来的研 物酶标记的山羊抗小鼠IgG二抗（北京中杉金桥生物技
究发现，TGF-β 1/Smads 信号通路可刺激炎症介质生成、 术有限公司，批号分别为 131879、131224），小鼠氧化低
参与血管新生、调控 VSMC 的增殖与迁移，而这些过程 密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL）、
在AS的发生发展过程中发挥着重要作用 [4－6] 。 白细胞介素1β（interleukin-1beta，IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死
香青兰 Dracocephalum moldavica L.为唇形科青兰 因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）、单核细胞趋
属一年生草本植物，以地上全草入药，具有清热燥湿、凉 化蛋白 1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）酶联
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肝止血的功效 。香青兰中主要含黄酮类、多糖、萜类等 免 疫 吸 附 检 测（enzyme-linked immunosorbent assay，
成分，其中黄酮类成分具有抗炎、抗氧化、保护心肌及抗 ELISA）试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公
AS等作用 [8－9] 。田蓟苷是香青兰总黄酮中的主要活性成 司，批号分别为 AK0017OCT19007、AK0017OCT19004、
分，具有降血脂、抗炎、抗氧化应激等作用，对AS具有一 AK0017OCT19006、AK0017OCT19003、AK0017OCT-
定的防治作用 [10－13] 。本课题组前期研究发现，田蓟苷可 19005），动物组织总 RNA 提取试剂盒、QuantiNova TM
以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠 VSMC 过度增殖和迁 SYBR Green PCR Kit（北京天根生化科技有限公司，批
®
移，并且此过程涉及TGF-β1/Smads信号通路的激活和调 号分别为 Q5920、154045739），cDNA 合成试剂盒、ECL
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控 。因此，本研究以载脂蛋白E基因敲除（ApoE －/－ ）小 超敏发光试剂盒（美国 Thermo Fisher Scientific 公司，批
鼠为动物模型，研究田蓟苷是否能通过调控 TGF-β 1/ 号分别为00422714、RJ238588），RIPA 组织细胞裂解液、
Smads 信号通路来抑制 ApoE －/－ 小鼠 AS 的形成，为进一 磷酸酶抑制剂混合物（北京索莱宝科技有限公司，批号
步阐明田蓟苷抑制AS的作用机制提供参考。 分别为 20150319、P1260），小鼠源 TGF-β 1单克隆抗体、
1 材料 兔 源 Smad2/3 单 克 隆 抗 体 、兔 源 磷 酸 化 Smad2/3
1.1 主要仪器 （p-Smad2/3）多克隆抗体、小鼠源细胞间黏附分子 1
本研究所用的主要仪器有 5430R 小型台式高速低 （intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）单克隆
温冷冻离心机（德国 Eppendorf 公司），XL-200 型低速离 抗体、兔源血管细胞间黏附分子1（vascular cell adhesion
心 仪 器（江 苏 海 门 其 林 贝 尔 仪 器 制 造 有 限 公 司）， molecule-1，VCAM-1）单克隆抗体、兔源增殖细胞核抗
EM-UC6 型超薄型切片仪、RM2245 型半自动石蜡切片 原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）单克隆抗体
机（美国Leica公司），VE-180型垂直电泳及电转仪（上海 （英国 Abcam Cambridge 公司，批号分别为 ab64715、
天能科技有限公司），EC3600 型凝胶成像系统（美国 ab202445、ab272332、ab171123、ab134047、ab92552）；其
UVP 公司），Rotor-Gene Q 型实时荧光定量-聚合酶链式 余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸馏水。
反 应（real-time quantitative polymerase chain reaction， PCR 实验中的引物序列均由生工生物工程（上海）股份
qRT-PCR）仪（德国 Qiangen 公司），Modular DPP-H7600 有限公司设计并合成。
型全自动生化分析仪（德国罗氏诊断有限公司），TES99 1.3 动物
型石蜡包埋机（湖北徕克医疗仪器有限公司），CKX53型 本研究所用动物为健康雄性 SPF 级 ApoE －/－ 小鼠
常规倒置显微镜（日本Olympus公司），M200 Pro型多功 （40 只）和健康雄性 SPF 级 C57BL/6J 小鼠（8 只）。两种
能酶标仪（瑞士Tacan公司）。 小鼠均为8周龄，体质量20～24 g，购于北京维通利华实
1.2 主要药品与试剂 验动物技术有限公司，实验动物生产合格证号均为
本研究所用的主要药品与试剂包括：田蓟苷（新疆 SCXK（京）2016-0011。所有小鼠均单笼单只饲养，饲养
维 吾 尔 自 治 区 药 物 研 究 所 ，批 号 20100626，纯 度 ≥ 期间自由进食和饮水。动物房环境温度为 22～25 ℃、
·20 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1 中国药房 2022年第33卷第1期
