Page 59 - 《中国药房》2021年24期

0.6 （n＝6），DNS法所得吸光度的RSD为0.99％（n＝6）。
0.5
2.2.4 重复性试验
0.4 取黄精细粉（编号 S3）0.05 g，按“2.1.2”项下方法制
吸光度 0.3 备黄精还原糖供试品溶液，共 18 份，按“2.2.1”项下 3 种
0.2
方法分别显色（每个方法各6份）后，使用紫外-可见分光
0.1
0 光度计分别于 625、490、520 nm 波长处测定吸光度。结
400 450 500 550 600 果显示，蒽酮-硫酸法所得含量的RSD为1.75％（n＝6），
波长，nm
苯酚-硫酸法所得含量的 RSD 为 5.01％（n＝6），DNS 法
图4 苯酚-硫酸法的紫外吸收光谱图（还原糖）
所得含量的RSD为1.43％（n＝6）。
Fig 2 UV absorption spectra of phenol-sulfuric acid
2.2.5 稳定性试验
method（reducing sugar）
取“2.1.2”项下黄精还原糖供试品溶液（编号S3），按
mL，混匀，于水浴中煮沸 5 min，然后冷却至室温，加水 “2.2.1”项下 3 种方法分别显色，并在室温下放置 0、10、
定容至10 mL，以不含对照品、供试品的反应体系为空白 20、30、60、90 min时分别于625、490、520 nm波长处测定
对照，使用紫外-可见分光光度计于450～700 nm波长范 吸光度。结果显示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的 RSD 为
围内进行扫描。结果显示，于500 nm波长左右，对照品溶 0.33％（n＝6），苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD为0.77％
液、黄精还原糖供试品溶液均有较大吸收，但此波长下 （n＝6），DNS法所得吸光度的RSD为0.65％（n＝6）。
DNS也有吸收，对测定结果有一定干扰。有研究认为，采 2.2.6 加样回收率试验
用DNS法测定还原糖时宜以520 nm为检测波长 ，故本 取已知含量的黄精细粉（编号 S3）0.05 g，按“2.1.2”
[12]
研究选择DNS法的检测波长为520 nm。结果见图5。 项下方法制备黄精还原糖供试品溶液。取 0.2 mL，共 6
3.5 份，分别精密加入“2.1.1”项下质量浓度为0.33 mg/mL的
0.01 mg/mL葡萄糖对照品溶液
3.0 0.02 mg/mL葡萄糖对照品溶液 葡萄糖对照品溶液0.4 mL（蒽酮-硫酸法）。取上述制备
2.5 0.03 mg/mL葡萄糖对照品溶液 的黄精还原糖供试品溶液 0.1 mL，共 6 份，分别精密加
吸光度 2.0 0.06 mg/mL葡萄糖对照品溶液 入“2.1.1”项下质量浓度为 0.125 mg/mL 的葡萄糖对照
0.09 mg/mL葡萄糖对照品溶液
1.5
0.12 mg/mL葡萄糖对照品溶液 品溶液0.4 mL（苯酚-硫酸法）。取上述制备的黄精还原
1.0
0.15 mg/mL葡萄糖对照品溶液 糖供试品溶液3.5 mL，共6份，分别精密加入“2.1.1”项下
0.5
0.18 mg/mL葡萄糖对照品溶液 质量浓度为1 mg/mL的葡萄糖对照品溶液0.3 mL（DNS
0 黄精还原糖供试品溶液（编号S3）
450 500 550 600 650 700 法）。按“2.2.1”项下 3 种方法分别显色后，使用紫外-可
波长，nm
见分光光度计分别于 625、490、520 nm 波长处测定吸光
图5 DNS法的紫外吸收光谱图（还原糖）
度并计算加样回收率。结果显示，蒽酮-硫酸法的加样回
Fig 5 UV absorption spectrum of DNS method（reducing
收率为 97.00％～108.30％，平均加样回收率为 103.40％
sugar）
（RSD＝1.25％，n＝6）；苯酚-硫酸法的加样回收率为
2.2.2 线性关系考察 95.00％～109.50％，平均加样回收率为 99.20％（RSD＝
（1）蒽酮-硫酸法：操作及结果同“2.1.4（1）”项。 3.47％，n＝6）；DNS法的加样回收率为95.00％～99.30％，
（2）苯酚-硫酸法：操作及结果同“2.1.4（2）”项。 平均加样回收率为96.95％（RSD＝1.19％，n＝6）。
（3）DNS 法：取“2.1.1”项下质量浓度为 1 mg/mL 的 2.2.7 黄精多糖及还原糖的含量测定
葡萄糖对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8 mL， 参考“2.1”“2.2”项下方法学考察结果，取4批黄精饮
按“2.2.1（3）”项下方法显色后，使用紫外-可见分光光度 片，按“2.1.2”项下方法分别制备黄精多糖、还原糖供试
计于520 nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度（x， 品溶液，采用蒽酮-硫酸法测定其中多糖的含量，采用
mg/mL）为横坐标、吸光度（y）为纵坐标进行线性回归。 DNS 法测定其中还原糖的含量，并计算总糖含量：总糖
结果显示，还原糖的回归方程为 y＝12.370 3x－0.120 2 含量＝多糖含量+还原糖含量。
（R ＝0.999 9），表明还原糖检测质量浓度的线性范围为 2.3 拉丁方设计优化黄精的酒蒸工艺
2
0.01～0.18 mg/mL。 2.3.1 因素与水平
2.2.3 精密度试验 以黄精多糖、还原糖、总糖含量和外观性状评分（外
取“2.1.2”项下黄精还原糖供试品溶液（编号S3），按 观性状评分为色泽、气味、质地评分之和，其标准 见表
[20]
“2.2.1”项下3种方法分别显色后，使用紫外-可见分光光 2）为指标，以加酒量（以药材总量的百分含量计）、蒸制
度计分别于 625、490、520 nm 波长处连续测定 6 次吸光 时间、闷润时间（蒸制时间为关注因素，其余因素为非关
度。结果显示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的 RSD 为 注因素 ）为因素，采用5×5拉丁方设计优化黄精的酒蒸
[21]
1.35％（n＝6），苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD为0.39％ 工艺。黄精酒蒸工艺拉丁方设计的因素与水平见表 3、

中国药房 2021年第32卷第24期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 24 ·2997 ·