Page 58 - 《中国药房》2021年24期

1.4 黄精多糖供试品溶液（编号S3） 备黄精多糖供试品溶液，共 12 份，再按“2.1.3”项下两种
1.2 0.33 mg/mL葡萄糖对照品溶液
1.0 方法分别显色（每个方法各6份）后，使用紫外-可见分光
吸光度 0.8 光度计分别于 625、490 nm 波长处测定吸光度。结果显
0.6
0.4 示，蒽酮-硫酸法所得含量的RSD为1.15％（n＝6），苯酚-
0.2
0 硫酸法所得含量的RSD为4.08％（n＝6）。
450 500 550 600 650 700
波长，nm 2.1.7 稳定性试验
图1 蒽酮-硫酸法的紫外吸收光谱图（多糖） 取“2.1.2”项下黄精多糖供试品溶液（编号 S3），按
Fig 1 UV absorption spectra of anthrone-sulfuric acid “2.1.3”项下两种方法分别显色，并在室温下放置 0、10、
method（polysaccharide） 20、30、60、90 min 时使用紫外-可见分光光度计分别于
分光光度计于400～600 nm波长范围内进行扫描。结果 625、490 nm 波长处测定吸光度。结果显示，蒽酮-硫酸
显示，于490 nm波长处，对照品溶液、黄精多糖供试品溶 法所得吸光度的 RSD 为 1.40％（n＝6），苯酚-硫酸法所
液均有最大吸收，故选择苯酚-硫酸法的检测波长为490 得吸光度的RSD为2.13％（n＝6）。
nm。结果见图2。 2.1.8 加样回收率试验
0.7 取已知含量的黄精细粉（编号 S3）0.05 g，共 12 份，
0.6 黄精多糖供试品溶液（编号S3）
按“2.1.2”项下方法制备黄精多糖供试品溶液，精密加入
0.5 0.125 mg/mL葡萄糖对照品溶液
对照品溶液 0.4 mL（蒽酮-硫酸法为 0.33 mg/mL 的葡萄
吸光度 0.4 糖对照品溶液，苯酚-硫酸法为0.125 mg/mL的葡萄糖对
0.3
0.2 照品溶液），混匀，再按“2.1.3”项下两种方法分别显色
0.1 （每个方法各6份）后，使用紫外-可见分光光度计分别于
0 625、490 nm 波长处测定吸光度并计算加样回收率。结
400 450 500 550 600
波长，nm 果 显 示 ，蒽 酮 - 硫 酸 法 的 加 样 回 收 率 为 98.50％ ～
图2 苯酚-硫酸法的紫外吸收光谱图（多糖）
100.80％，平均加样回收率为99.75％（RSD＝0.48％，n＝
Fig 2 UV absorption spectra of phenol-sulfuric acid 6）；苯酚-硫酸法的加样回收率为107.50％～121.50％，平
method（polysaccharide） 均加样回收率为112.80％（RSD＝2.36％，n＝6）。
2.1.4 线性关系考察 2.2 黄精中还原糖的含量测定方法比较
（1）蒽酮-硫酸法：分别精密量取“2.1.1”项下质量浓 2.2.1 检测波长的选择
度为 0.33 mg/mL 的葡萄糖对照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、 （1）蒽酮-硫酸法：取“2.1.2”项下黄精还原糖供试品
1.0 mL，按“2.1.3（1）”项下方法显色后，使用紫外-可见分 溶液（编号S3），共6份，其余操作及结果（未取葡萄糖对
光光度计于625 nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量 照品溶液）同“2.1.3（1）”项。结果见图3。
浓度（x，mg/mL）为横坐标、吸光度（y）为纵坐标进行线
0.7
性回归。结果显示，多糖的回归方程为 y＝37.363 6x－ 0.6
2
0.025 8（R ＝0.999 9），表明多糖检测质量浓度的线性范 0.5
围为0.006 6～0.033 mg/mL。 吸光度 0.4
0.3
（2）苯酚-硫酸法：分别精密量取“2.1.1”项下质量浓 0.2
度为 0.125 mg/mL 的葡萄糖对照品溶液 0.2、0.4、0.8、 0.1
0
1.2、1.6、2.0 mL，按“2.1.3（2）”项下方法显色后，使用紫 450 500 550 600 650 700
外-可见分光光度计于490 nm波长处测定吸光度。以葡 波长，nm
图3 蒽酮-硫酸法的紫外吸收光谱图（还原糖）
萄糖质量浓度（x，mg/mL）为横坐标、吸光度（y）为纵坐
[19]
标进行线性回归 。结果显示，多糖的回归方程为 y＝ Fig 3 UV absorption spectra of anthrone-sulfuric acid
41.298x－9.000×10 （R ＝0.999 2），表明多糖检测质量 method（reducing sugar）
－5
2
浓度的线性范围为0.002 5～0.025 mg/mL。 （2）苯酚-硫酸法：取“2.1.2”项下黄精还原糖供试品
2.1.5 精密度试验 溶液（编号S3），共6份，其余操作及结果（未取葡萄糖对
取“2.1.2”项下黄精多糖供试品溶液（编号 S3），按 照品溶液）同“2.1.3（2）”项。结果见图4。
“2.1.3”项下两种方法分别显色后，使用紫外-可见分光光 （3）DNS 法：分别精密吸取“2.1.2”项下黄精还原糖
度计分别于625、490 nm波长处连续测定6次吸光度。结 供试品溶液（编号 S3）3.5 mL、“2.1.1”项下质量浓度为 1
果显示，蒽酮-硫酸法所得吸光度的RSD为2.60％（n＝6）， mg/mL 的葡萄糖对照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.6、0.9、1.2、
苯酚-硫酸法所得吸光度的RSD为3.67％（n＝6）。 1.5、1.8 mL，加水至 4 mL，分别精密加入 DNS 溶液（取
2.1.6 重复性试验 DNS 0.65 g，用水溶解后，加入 2 mol/L 氢氧化钠溶液
取黄精细粉（编号 S3）0.05 g，按“2.1.2”项下方法制 2.5 mL、丙三醇 4.5 g，再用水定容至 100 mL，即得）5

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