Page 46 - 《中国药房》2021年24期

混悬液呈淡蓝色乳光。取上述混悬液适量，采用激光粒 聚山梨酯80，下同）20 mL中，于（37.0±0.5）℃条件下以
度分析仪，在25 ℃下测定CHE-NPs的粒径和Zeta电位， 100 r/min恒温振荡，分别于孵育1、2、4、6、8、12、24、48 h
重复测定 3 次。结果显示，CHE-NPs 的粒径为（113.1± 时取样1 mL，同时补足等温等体积的生理盐水。样品于
1.40）nm，Zeta电位为（－21.6±0.29）mV，多分散性指数 60 ℃水浴中挥干，残渣加甲醇 1 mL 复溶，用 0.22 μm 微
为0.07±0.01（n＝3）。CHE-NPs的粒径分布图见图5。 孔滤膜滤过，取续滤液按“2.2.1”项下色谱条件进样测
25 定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中 CHE 的质量
20 浓度。实验平行操作3次，按以下公式计算累积释放率：
％ 15 t－1
占比， 10 累积释放率＝（V0cn+V∑ ct ）/M 药 （式中，V0表示释放介质
n＝1
5
总体积，t 表示 n－1，cn表示第 n 个时间点所测得的 CHE
0
0.1 1 10 100 1 000 10 000 100 000 质量浓度，V表示每次取样的体积，ct表示n－1个时间点
粒径，nm 所测得的CHE质量浓度，M 药表示投入药物总质量）。采
图5 CHE-NPs的粒径分布图
用Origin 2021软件，以累积释放率（Q）和释放时间（t）对
Fig 5 Distribution of particle size of CHE-NPs
CHE-NPs的体外释药行为进行零级动力学模型、一级动
2.5.2 形态观察 吸取按最优处方制备的 CHE-NPs 1 力学模型、Higuchi动力学模型、Weibull动力学模型方程
mL，加水稀释 10 倍，用 2％磷钨酸于室温下染色 1～2 拟合。结果显示，CHE 对照品溶液在孵育 8 h 时的累积
min，于透射电子显微镜下进行形态观察。结果显示，所
释放率已达90.87％，提示已基本释放完全，而CHE-NPs
得 CHE-NPs 呈球形，表面光滑、圆整，大小均匀，分散良
在孵育 8 h 时的累积释放率为 68.68％，48 h 时的累积释
好。结果见图6。
放率为 88.72％，具有缓释特征，其体外释药行为符合
Weibull动力学模型。CHE对照品和CHE-NPs的体外释
放曲线见图 7，CHE-NPs 的体外释药动力学方程拟合结
果见表5。

100
80
60
％
Q，
40
20 CHE对照品
CHE-NPs
图6 CHE-NPs的透射电子显微图 0
0 10 20 30 40 50
Fig 6 Transmission electron micrograph of CHE-NPs t，h
2.6 体外稳定性考察 图7 CHE对照品和CHE-NPs的体外释放曲线（n＝3）
将按最优处方制备的 CHE-NPs 置于 4 ℃冰箱中冷 Fig 7 Release curves in vitro of CHE control and
藏，分别于冷藏 0、7、14 d 时取样，按“2.5”项下方法测定 CHE-NPs（n＝3）
粒径、Zeta 电位及多分散性指数。结果显示，CHE-NPs 表5 CHE-NPs的体外释药动力学方程拟合结果
的粒径、Zeta 电位及多分散性指数均无明显变化，其混 Tab 5 Equation fitting results of drug release in vitro
悬液仍呈淡蓝色乳光，说明CHE-NPs的稳定性良好。结 of CHE-NPs
果见表4。 模型 拟合方程 R 2
表4 CHE-NPs的体外稳定性试验结果（n＝3） 零级动力学 Q＝47.69+1.09t 0.528 9
－0.25t
Tab 4 Results of stability tests in vitro of CHE-NPs 一级动力学 Q＝84.01（1－e ） 0.951 1
1/2
Higuchi动力学 Q＝10.16t +30.25 0.757 6
（n＝3）
Weibull动力学 ln[ln（1/Q）]＝0.89lnt－1.98 0.986 7
参数 0 d 7 d 14 d 2.8 体外抑瘤作用评价
平均粒径，nm 113.10±1.40 112.27±0.83 113.53±0.93
Zeta电位，mV －21.60±0.29 －20.79±0.67 －15.47±0.41 2.8.1 空白 NPs 的细胞毒性 采用 MTT 法进行检测。
多分散性指数 0.07±0.01 0.10±0.03 0.09±0.00 取处于对数生长期的 B16 黑色素瘤细胞，以 5 000 个/孔
2.7 体外释药实验 接种于 96 孔板中，于 37 ℃、5％CO2培养箱中孵育 24 h
采用动态透析法进行考察。精密量取 CHE 对照品 至细胞贴壁。实验共设置9个组别，分别为空白组（无细
溶液、按最优处方制备的CHE-NPs各5 mL，分别置于预 胞、无药物）、对照组（有细胞、无药物）和不同质量浓度
[21]
处理后的透析袋中，两头扎紧，置于生理盐水（含 0.3％ （10、25、50、100、250、500、1 000 μg/mL ，以mPEG-PLGA

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