Page 43 - 《中国药房》2021年24期
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白屈菜红碱（chelerythrine，CHE）是来源于苗药号筒               7.2，批号 20201217）、MTT 试剂（批号 309E059）、二甲基
        杆 Macleaya cordata（Willd.）R. Br.、白屈菜 Chelidonium   亚砜（DMSO，批号 1121E0325）均购自北京索莱宝科技
        majus Linn.等药用植物的生物碱类活性成分。大量研究                     有限公司；泊洛沙姆 188（F68，批号 T24J10Z80481）购自
        数据显示，CHE 具有抑制肿瘤细胞生长的作用，包括人                         上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司 ；胎 牛 血 清（批 号
        结肠癌HCT-116、人肝癌HepG2、小鼠黑色素瘤B16细胞                    20200328）、青-链霉素双抗（批号20200703）均购自赛澳
        等 [1－4] 。但 CHE 的水溶性差，加之游离药物本就难以在                   美细胞技术（北京）有限公司；含乙二胺四乙酸（EDTA）
        肿瘤部位扩散、渗透，从而导致该成分的开发利用受到                           的0.25％胰蛋白酶（批号2277237）购自赛默飞世尔科技
        限制  [5－6] 。本研究拟结合现代药剂学新理论与新技术，                     （中国）有限公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规
        将难溶性CHE载于高分子载体中以制备纳米粒，以期提                          格，水为蒸馏水。
        高其生物利用度、增强其抗肿瘤活性。                                  1.3 细胞
            纳米递药系统在肿瘤组织中表现出较好的渗透性                              小鼠 B16 黑色素瘤细胞（货号 ZQ0186）购自上海中
        和滞留效应，在构建该系统时，选择合适的纳米载体可                           乔新舟生物科技有限公司。
                                [7]
        改善药物的递送和释放性能 。将亲水性的甲氧基聚乙                           2 方法与结果
        二醇（methoxy polyethylene glycol，mPEG）嵌段引入聚乳         2.1 CHE-NPs及空白NPs的制备
        酸-羟基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic acid），PLGA]          采用纳米沉淀法制备 CHE-NPs 。精密称取处方
                                                                                           [15]
        分子链中，制成 mPEG-PLGA 聚合物，该聚合物具有疏                      量的 mPEG-PLGA 聚合物和 CHE 原料药分散于丙酮 1
        水和亲水的双重特性，同时mPEG可以保护纳米粒不受                          mL中，超声（功率500 W，频率53 kHz，下同）处理5 min，
        网状内皮系统的影响，使纳米粒在体内循环中拥有较长                           作为有机相。配制质量分数为 0.4％的 F68 溶液，取 5
        的半衰期    [8－11] ；PLGA 的存在也可使所载药物不被快速                mL，作为水相。在1 000 r/min条件下，以1 mL/min的速
        降解  [12－14] 。本研究选择两亲性mPEG-PLGA聚合物作为                度将有机相缓慢滴加到水相中，室温搅拌 10 min，得到
        载体材料，制备 CHE 纳米粒（CHE-NPs）并优化其处方，                    淡蓝色乳光的混悬液，使用旋转蒸发仪除去有机溶剂，
        考察所制CHE-NPs的粒径、Zeta电位等参数以及体外释                      即 得 CHE-NPs。 按 上 述 方 法 制 备 不 含 CHE 的 空 白
        药行为，评价CHE-NPs对B16黑色素瘤细胞的体外抑制                       NPs。CHE-NPs的结构示意图见图1。
        作用，以期构建一种对黑色素瘤抑制活性更强的纳米载
        药制剂。
        1 材料                                                          mPEG-PLGA
        1.1  主要仪器
                                                                        CHE
            本研究所用主要仪器包括 1260 型高效液相色谱
                                                                                          CHE-NPs
       （HPLC）仪（美国Agilent公司），SK8200H型超声波清洗
                                                                      图1 CHE-NPs的结构示意图
        机（上海科导超声仪器有限公司），3310-DMP 型激光粒
                                                                   Fig 1  Structure diagram of CHE-NPs
        度分析仪（美国 Beckman 公司），RCT basic 型磁力搅拌
        器（德国Ika公司），H2050R型台式高速大容量冷冻离心                      2.2  CHE的含量测定
        机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），N-1300型旋转                       2.2.1  色谱条件      以Ultimate XB-C18 （250 mm×4.6 mm，
        蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司），JEM-1400FLASh型透                    5 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％磷酸溶液（B）为流动
        射电子显微镜（日本 JEOL 公司），AUW12D 型电子分析                    相进行梯度洗脱（0 min，20％A；20 min，60％A；25 min，
        天平（日本 Shimadzu 公司），T09-1S 型酶标仪、3111 型              95％A；35 min，20％A）；流速为0.8 mL/min；检测波长为
        CO2培养箱、Sorvall ST 8R型低温离心机[赛默飞世尔科                  270 nm，柱温为35 ℃；进样量为10 μL。
        技（中国）有限公司]，CKX53 型倒置荧光显微镜（日本                       2.2.2  对照品溶液的配制            精密称定 CHE 对照品 5
        Olympus公司）等。                                       mg，置于 25 mL 量瓶中，加入甲醇超声 10 min，使其溶
        1.2 主要药品与试剂                                        解，再加入甲醇稀释、定容，摇匀，制成质量浓度为 200
            CHE对照品（批号AF9030102，纯度≥98％）购自成                  μg/mL的对照品溶液。
        都 埃 法 生 物 科 技 有 限 公 司 ；CHE 原 料 药（批 号               2.2.3  供试品溶液的配制         精密量取CHE-NPs 0.1 mL，
        34316-15-9，纯度＞98％）购自西安开来生物工程有限公                    置于 2 mL 量瓶中，加甲醇 1.9 mL，超声 30 min 破乳，在
        司；mPEG-PLGA 聚合物[mPEG 分子量 2 000 Da，PLGA             35 ℃条件下以氮气流吹干，残渣加甲醇 2 mL 复溶，用
        分子量 15 000 Da，乳酸（LA）/乙醇酸（GA）比例 50 ∶ 50]            0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
        购自济南岱罡生物工程有限公司；聚山梨酯 80（批号                          2.2.4  方法学考察       参考文献[16－17]方法进行方法学
        301C054）、MD34 透析袋（截留分子量 3 500 Da）、RPMI             考察。结果显示，溶剂（甲醇）、载体材料对 CHE-NPs 中
        1640 培养基（批号 20210531）、磷酸盐缓冲液（PBS，pH                CHE 的检测无干扰（图 2）；以 CHE 质量浓度（x，μg/mL）


        中国药房    2021年第32卷第24期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 24  ·2981 ·
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