Page 44 - 《中国药房》2021年24期

为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方 浓度达到最大值。因此，本研究选择 1.5 h 为透析平衡
程为 y＝14.868x－0.813 3（R ＝0.999 8），CHE 检测质量 时间。
2
浓度的线性范围为 0.125～200 μg/mL；精密度试验的 1.2
RSD 为 0.22％（n＝6）；平均回收率为 100.99％（RSD＝
1.1
2.32％，n＝6）；稳定性（12 h）试验的 RSD 为 1.46％（n＝
6）；重复性试验的RSD为1.21％（n＝6）。 1.0
c，g/mL μ 0.9

300
0.8
200 0.7
mAU 0 1 2 3 4
100 t，h
图3 CHE-NPs的浓度-平衡时间曲线
0
Fig 3 Concentration-equilibrium time curve of CHE-
0 2 4 6 8 10 12
t，min NPs
A.空白NPs
2.3.3 包封率与载药量的测定方法 精密吸取 CHE-
300 NPs 2 mL，置于透析袋内，两头扎紧。将封口的透析袋
CHE
置于锥形瓶中，以水50 mL为透析介质，转速为600 r/min，
200
mAU 于透析 1.5 h 时精密吸取外液 0.5 mL，用甲醇稀释至 1
100
mL，再用 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液按“2.2.1”项
0 下色谱条件进样测定，记录峰面积，代入回归方程计算
0 2 4 6 8 10 12 外液中 CHE 的质量浓度。按以下公式计算包封率和载
t，min
B. CHE对照品溶液 药量：包封率（％）＝（药物总量－外液中药物含量）/药物
总量×100％，载药量（％）＝（药物总量－外液中药物含
40
量）/（药物总量+辅料总量）×100％。
CHE 2.4 Box-Behnken响应面设计优化CHE-NPs的处方
mAU 20 本课题组前期以有机溶剂种类、有机相与水相比
例、F68浓度、磁力搅拌器转速、载体材料质量浓度、投药
0
量、载体材料种类为影响因素进行单因素实验，考察其
0 2 4 6 8 10 12
t，min 对 CHE-NPs 包封率、载药量的影响。在单因素实验的
C. CHE-NPs 基础上，本研究选择对包封率和载药量影响较大的因
图2 CHE-NPs中CHE定量分析的HPLC图
素——CHE投药量（A）、mPEG-PLGA质量浓度（B）、F68
Fig 2 HPLC chromatograms for quantitative analysis
浓度（C）为自变量，以包封率（Y1 ）和载药量（Y2 ）的总评归
of CHE in CHE-NPs
一（OD）值为因变量，采用 Box-Behnken 响应面设计，以
2.3 包封率与载药量的测定 Design Expert 12软件优化CHE-NPs处方。由于Y1、Y2的
2.3.1 透析袋的预处理 取透析袋，剪成适宜长度，放入 取值越大越好，故选择对应 dmax[dmax＝（Y i－Ymin ）/（Ymax－
水中煮沸10～20 min，冷却后取出，浸泡在水中，备用。
Ymin ）]以计算 OD 值：OD＝（d1×d2 ） [19－20] 。CHE-NPs 处方
2.3.2 透析平衡时间的确定 精密吸取 CHE-NPs 2
优化 Box-Behnken 响应面设计的因素与水平见表 1，实
mL，置于透析袋内，两头扎紧。将封口的透析袋置于锥
验安排与结果见表2。
形瓶中，以水50 mL为透析介质，转速为600 r/min，分别
表 1 CHE-NPs 处方优化 Box-Behnken 响应面设计的
于透析 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h 时精密吸取外液
因素与水平
0.5 mL，同时补足等体积水 。用甲醇将外液稀释至 1
[18]
Tab 1 Factors and levels of Box-Behnken response
mL，用 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液按“2.2.1”项下
surface design for formulation optimization of
色谱条件进样测定，记录峰面积，代入回归方程计算外
CHE-NPs
液中CHE的质量浓度，同时绘制浓度-平衡时间曲线（图
水平 A（CHE投药量），mg B（mPEG-PLGA质量浓度），mg/mL C（F68浓度），％
3）。由图 3 可知，随着透析时间的延长，CHE 的质量浓
－1 1.0 10 1.0
度呈先升高后降低再升高再降低的趋势，说明CHE-NPs 0 1.5 15 1.5
已逐渐破裂；当透析时间为1.5 h时，外液中CHE的质量 1 2.0 20 2.0
·2982 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 24 中国药房 2021年第32卷第24期