Page 26 - 《中国药房》2021年24期

7.996 μmol/L，respectively；the rate of cell clone formation was decreased significantly after treated with 6 μmol/L solamargine for
10 days（P＜0.05）. The apoptotic rate of HepG2 cells，mRNA expression of Bax and caspase-3，protein expression of cleaved
caspase-3（except for 8 μmol/L）as well as ratio of p-AMPKα to AMPKα（except for 8 μmol/L）were all increased significantly
after treated with 6，8 μmol/L solamargine（P＜0.05）；mRNA and protein expression of Bcl-2 were decreased significantly（P＜
0.05）；the changes of some indexes were in a concentration-dependent manner. The compound C could inhibit protein expression of
AMPKα，and reverse the inhibitory effect of solamargine on Bcl-2 protein. CONCLUSIONS：Solamargine can inhibit the proliferation
of HepG2 cells and induce apoptosis，the mechanism of which may be associated with activating AMPK signaling pathway.
KEYWORDS Solamargine；Human hepatocarcinoma cells HepG2；Growth；Apoptosis；AMPK signaling pathway

肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，也是恶性肿瘤 试剂（批号S3444）购自美国MP Biomedicals公司；4％多
导致患者死亡的第三大原因 。目前，手术切除是肝细 聚甲醛固定液、结晶紫染色液均购自上海碧云天生物技
[1]
胞癌的最佳治疗方法，特别是在发病早期且肿块直径小 术有限公司；兔源磷酸化AMPKα（p-AMPKα）（T172）单
于 2 cm 时，手术切除是最有效的方法，但患者的 5 年复 克隆抗体、兔源AMPKα单克隆抗体、兔源B细胞淋巴瘤
发率仍高达 68％ [2－3] 。近年来，化疗和靶向治疗在肝癌 2（Bcl-2）单克隆抗体、兔源胱天蛋白酶3（caspase-3）单克
的治疗中得到了广泛的应用，其代表药物索拉非尼和仑 隆抗体、兔源β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体、兔源剪切
伐替尼可以明显提高无法进行手术的肝癌患者的生存 的caspase-3（cleaved caspase-3）单克隆抗体和RIPA细胞
率 [4－5] 。然而，分子靶向治疗的耐受性和相对严重的副 裂 解 液（批 号 分 别 为 50081S、5832S、4223S、9665S、
[6]
作用限制了这类药物在临床上的进一步应用 。因此， 4970S、9664S、7723S）均购自美国CST公司；辣根过氧化
寻找新的肝癌治疗方法和抗肝癌药物意义重大。 物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（H+L）二抗（批号
澳洲茄边碱（solamargine）是中药龙葵 Solanum ni- 1706515）购自美国 Bio-Rad 公司；膜联蛋白Ⅴ（Annexin
grum L.生物碱中的主要成分，属于甾体生物碱的胆甾烷 Ⅴ）-异硫氰酸荧光素（FITC）/碘化丙啶（PI）凋亡试剂盒
衍生物，已被证实对非小细胞肺癌、肝癌等多种恶性肿 （批号73001255）购自杭州联科生物科技股份有限公司；
瘤细胞的生长有明显的抑制作用 [7－10] 。但该成分抑制肝 DMEM培养基、胎牛血清、青-链霉素溶液和0.25％胰蛋
癌细胞生长的分子机制尚不明确。腺苷一磷酸活化蛋 白酶-乙二胺四乙酸（EDTA）消化液均购自美国Gibco公
白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）是维持细 司；BCA 蛋白定量试剂盒（批号 VK314219）购自美国
胞能量稳态的重要介质，活化后的AMPK可以通过抑制 Thermo Fisher Scientific 公司；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路来促进细胞凋 购自美国Millipore公司；Trizol试剂（批号74117）购自美
[11]
亡 。基于此，本研究拟探讨澳洲茄边碱对人肝癌 国 Life Invitrogen 公司；Evo M-MLV 反转录预混型试剂
HepG2细胞生长和凋亡的影响，以及可能涉及的分子机 盒、SYBR Green Premix Pro Taq HS qPCR Kit（批号分
®
制，为该成分在肝癌临床治疗领域中的应用提供参考。 别为 AG11728、AG11718）均购自艾科瑞生物科技有限
1 材料 公 司 ；AMPK 抑 制 剂 6-｛4-[2-（1- 哌 啶 基）乙 氧 基] 苯
1.1 主要仪器 基｝-3-（4-吡啶基）吡唑并[1，5-A]嘧啶对照品（compound
本研究所用主要仪器有 SYNERGY-H1 型多功能酶 C，批号HY-13418A，纯度99.65％）购自美国MCE公司；
标仪（美国 BioTek 公司），TS2 型倒置生物显微镜（日本 ECL 化学发光超敏显色试剂盒（批号 36208ES76）购自
Nikon 公司），Centrifuge 5430R 型高速离心机、Galaxy 翌圣生物科技（上海）股份有限公司；其余试剂均为分析
170S 型 CO2 细胞培养箱（德国 Eppendorf 公司），Novo 纯或实验室常用规格，水为超纯水。
Quanteon型流式细胞仪（美国ACEA Biosciences公司）， 1.3 细胞
ViiA 7 型荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪（美国 ABI 公 本研究所用人肝癌 HepG2 细胞购自广州赛库生物
司），Mini-PROTEAN Tetra cell 小型垂直电泳转印系 科技有限公司。
®
统、ChemiDoc Touch 型高灵敏度化学发光成像仪（美国 2 方法
Bio-Rad公司），NanoDrop 2000型超微量分光光度计（美 2.1 澳洲茄边碱溶液的制备
国 Thermo Fisher Scientific 公司），ELPH 1301S 型相机 取澳洲茄边碱对照品适量，用DMSO溶解、稀释，制
（日本Canon公司）等。 成浓度为 50 mmol/L 的贮备液，分装后，于－20 ℃冰箱
1.2 主要药品与试剂 中保存，备用。
澳洲茄边碱对照品（批号 MUST-20112005，纯度≥ 2.2 细胞培养
98％）购自成都曼斯特生物科技有限公司；二甲基亚砜 HepG2细胞用含10％胎牛血清、100 u/mL青霉素和
（DMSO，批号 RNBH8343）购自美国 Sigma 公司；MTT 100 μg/mL 链霉素的 DMEM 培养基（下文简称“DMEM

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