Page 28 - 《中国药房》2021年24期

液混合，用移液枪均匀加至膜上，再用高灵敏度化学发 澳洲茄边碱作用后 HepG2 细胞的凋亡率均显著高于空
光成像仪成像，用 Image Lab 5.2.1 软件分析目标蛋白与 白组和 4 μmol/L 澳洲茄边碱（P＜0.05），故后续细胞克
内参蛋白（β-actin）的灰度值比值，并计算 p-AMPKα/ 隆形成实验和机制验证实验以 6 μmol/L 作为澳洲茄边
AMPKα，再将上述结果与空白组比较进行归一化处理， 碱的作用浓度。澳洲茄边碱对 HepG2 细胞凋亡率的影
作为目标蛋白的表达量。 响见图1。
另取对数生长期的 HepG2 细胞，按“2.4”项下方法 10 6.5 10 6.5
接种后分为空白对照组、澳洲茄边碱组、compound C 组
和 compound C+澳洲茄边碱组，每组设置 3 个复孔。相 10 5 10 5
应药物组加入含compound C 5 μmol/L 的DMEM完全 PI-A PI-A
[12]
10 4 10 4
培养基2 mL，培养2 h后，弃去培养基，再（或）加入含澳
洲茄边碱 6 μmol/L（浓度根据“2.5”项下结果设置）的 10 2.8 10 2.8
10 3.8 10 5 10 6 10 7.2 10 3.8 10 5 10 6 10 7.2
DMEM完全培养基2 mL，继续培养24 h，然后按上述方 FITC-A FITC-A
法测定细胞中AMPKα、Bcl-2蛋白的表达量。 A. 0 μmol/L澳洲茄边碱（空白组） B. 4 μmol/L澳洲茄边碱
10 6.5 10 6.5
2.9 统计学方法
采用 GraphPad Prism 7 软件进行数据分析及作图。
10 5 10 5
实验结果采用x±s表示，两组间比较采用t检验；多组间 PI-A PI-A
比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用Bonfer- 10 4 10 4
roni检验。检验水准α＝0.05。
3 结果 10 2.8 10 3.8 10 5 10 6 10 7.2 10 2.8 10 3.8 10 5 10 6 10 7.2
FITC-A
FITC-A
3.1 澳洲茄边碱对HepG2细胞存活率的影响 C. 6 μmol/L澳洲茄边碱 D. 8 μmol/L澳洲茄边碱
与空白组比较，1～12 μmol/L 澳洲茄边碱作用 24、 图1 澳洲茄边碱对HepG2细胞凋亡率影响的流式图
48 h 后，HepG2 细胞存活率均显著降低（P＜0.05），且有 Fig 1 Flow charts of the effects of solamargine on the
浓度依赖趋势。澳洲茄边碱作用24、48 h对HepG2细胞 apoptosis rate of HepG2 cells
的半数抑制浓度分别为 8.310、7.996 μmol/L，故后续实 3.3 澳洲茄边碱对HepG2细胞克隆形成的影响
验以4、6、8 μmol/L作为澳洲茄边碱的作用浓度，24 h作 经6 μmol/L澳洲茄边碱作用10 d后，HepG2细胞的
为其作用时间。澳洲茄边碱作用24、48 h对HepG2细胞 克隆形成率较空白组显著降低[（20.666±5.033）％vs.
存活率的影响见表2。 （32.667±3.055）％，P＜0.05]。澳洲茄边碱对 HepG2 细
表2 澳洲茄边碱作用24、48 h对HepG2细胞存活率的 胞克隆形成的影响见图2。
影响（x±±s，n＝3，％％）
Tab 2 Effects of solamargine on the survival rate of
HepG2 cells after treated with solamargine for
24 and 48 h（x±±s，n＝3，％％）
澳洲茄边碱浓度，μmol/L 24 h 48 h
0（空白组） 103.185±4.246 104.459±8.515
1 87.864±1.936 ＊ 90.505±6.510 ＊
2 85.923±5.023 ＊ 88.291±5.566 ＊ A. 0 μmol/L澳洲茄边碱（空白组） B. 6 μmol/L澳洲茄边碱
4 77.426±6.999 ＊ 82.808±7.114 ＊
6 68.646±5.863 ＊ 77.905±7.364 ＊ 图2 澳洲茄边碱对HepG2细胞克隆形成的影响
8 61.737±9.603 ＊ 56.415±9.358 ＊ Fig 2 Effects of solamargine on clone formation of
10 43.028±7.115 ＊ 24.502±3.648 ＊ HepG2 cells
12 28.529±4.197 ＊ 14.956±0.775 ＊
注：与空白组比较，P＜0.05 3.4 澳 洲 茄 边 碱 对 HepG2 细 胞 中 Bcl-2、Bax、cas-
＊
Note：vs. blank group，P＜0.05 pase-3 mRNA表达的影响
＊
3.2 澳洲茄边碱对HepG2细胞凋亡率的影响 与空白组比较，6、8 μmol/L 澳洲茄边碱作用 24 h
0、4、6、8 μmol/L澳洲茄边碱作用24 h后，HepG2细 后，HepG2 细胞中 Bcl-2 mRNA 的表达量均显著降低
胞的凋亡率分别为（8.687±0.331）％、（9.707±0.891）％、 （P＜0.05），Bax、caspase-3 mRNA 的表达量均显著升高
（12.753±0.534）％、（13.900±1.015）％，其中6、8 μmol/L （P＜0.05）。与4 μmol/L澳洲茄边碱比较，6、8 μmol/L澳

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