Page 81 - 《中国药房》2021年23期

为 5 000 V，去簇电压为 60 V，入口电压为 10 V，碰撞能 （n＝5）分别为 4.0％、3.6％、4.9％，日间精密度RSD（n＝
为31 eV，出口电压为10 V，霉酚酸选择反应监测离子对 5）分别为6.0％、4.5％、6.5％，低、中、高质量浓度质控品
为 m/z 338.1→m/z 207.1，内标为m/z 352.1→m/z 221.1。 的回收率分别为99.0％、94.4％、97.9％，符合标准 。
[6]
2.3.2 血液样本检测 将 LC-MS2020 型高效液相色谱 2.5 统计学方法
仪配套 Triple Quad 4500 型质谱检测仪，按相应说明书 采用 MedCalc v19.5.6 统计软件对检测结果进行
®
操作进行检测。取血清100 μL，加入甲醇500 μL，涡旋或 统计分析。通过 Kolmogorov-Smirnov 法检验样本的正
振摇 1 min，以14 000 r/min离心10 min；取上清液100 μL， 态性，数据为非正态分布时以M（P25，P75 ）进行统计描述，
用100 μL稀释液复溶，再涡旋混匀，上机进样，色谱图见 采用 Wilcoxon 配对检验比较两组样本的差异。采用
图1。结果显示，霉酚酸线性范围为0.07～33.36 μg/mL， Passing-Bablok 法进行回归分析，采用 Cusum 法进行回
最低定量限为0.07 μg/mL。 归偏倚检验；进行 Spearman 相关分析，相关系数＞0.85
霉酚酸： 表示呈高度相关。采用 Bland-Altman 散点图进行偏倚
700 1.5×10 6 1.27 2.5×10 5 1.27 分析。检验水准α＝0.05。
霉酚酸血药浓度，g/mL μ 500 1.66 霉酚酸血药浓度，g/mL μ 1.0×10 6 5 霉酚酸血药浓度，g/mL μ 2.0×10 5 5 5 2.6 血清样本检测结果比较 本研究共收集 61 份
600
400
1.5×10
计量资料的统计描述结果
2.6.1
300
1.0×10
5.0×10
200
儿童患者血液样本，Kolmogorov-Smirnov 法分析显示，
100
0
0.5 1 1.5 2 2.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 5.0×10 0 4 0.5 1 1.5 2 2.5 分别以荧光免疫层析法、LC-MS/MS法、EMIT法检测所
t，min t，min t，min 得的霉酚酸血药浓度数据均呈非正态分布，详见表1。
A.空白血清 C.空白血清+霉酚酸标 E.患者血清样本+内标
准品+内标 表1 荧光免疫层析法、LC-MS/MS法、EMIT法检测霉
内标： 酚酸血药浓度的统计描述结果（n＝61，μg/mL）
9.0×10 5 5 5 1.28 μ 9.0×10 5 5 5 1.28 Tab 1 Statistical description of mycophenolic acid by
700
1.67
8.0×10
霉酚酸血药浓度，g/mL μ 500 霉酚酸血药浓度，g/mL μ 6.0×10 5 5 5 5 5 霉酚酸血药浓度，g/mL 6.0×10 5 5 5 5 5 方法 fluorescence immunochromatography， LC-
8.0×10
600
7.0×10
7.0×10
5.0×10
400
5.0×10
MS/MS and EMIT（n＝61，μg/mL）
4.0×10
4.0×10
300
3.0×10
3.0×10
200
中位数
95％CI
最小值
最大值
标准差
平均值
2.0×10
2.0×10
100
0
0.5 1 1.5 2 2.5 1.0×10 0 5 0.5 1 1.5 2 2.5 1.0×10 0 5 0.5 1 1.5 2 2.5 荧光免疫层析法 5.87 3.89 5.24 3.87～6.01 1.17 17.85
t，min t，min t，min LC-MS/MS法 5.22 4.49 3.78 2.83～5.13 0.69 19.35
B.空白血清 D.空白血清+霉酚酸标 F.患者血清样本+内标 EMIT法 7.20 4.12 6.32 5.56～7.00 1.16 16.86
准品+内标
2.6.2 回归分析结果 Passing-Bablok 回归分析结果显
图1 LC-MS/MS法检测霉酚酸血药浓度的色谱图
示，荧光免疫层析法与LC-MS/MS法检测霉酚酸血药浓
Fig 1 Chromatogram of blood concentration of myco-
度的回归方程为 C 荧光免疫层析＝0.928 3CLC-MS/MS+0.961 7，其
phenolic acid by LC-MS/MS
截距为0.961 7（95％CI：0.738 8～1.336 5）、斜率为0.928 3
2.3.3 精密度与回收率试验 分别取低、中、高质量浓 （95％CI：0.860 7～1.009 2），Cusum法检验显示回归偏倚
度（0.34、4.08、16.68 μg/mL）的霉酚酸质控品，每日平行 无统计学意义（P＝0.22）；荧光免疫层析法与EMIT法检测
操作 5 次，连续检测 3 d，计算 LC-MS/MS 法检测霉酚酸 霉酚酸血药浓度的回归方程为C 荧光免疫层析＝0.880 7CEMIT－
的日内、日间精密度 RSD 和回收率。结果显示，日内精 0.488 2，其截距为－0.488 2（95％CI：－0.888 3～－0.014 4）、
密度RSD（n＝5）分别为 3.4％、1.8％、3.9％，日间精密度 斜率为 0.880 7（95％CI：0.744 5～1.057 5），Cusum 法检
RSD（n＝5）分别为 4.4％、3.4％、2.2％，低、中、高质量浓 验显示回归偏倚无统计学意义（P＝0.78）。Passing-Bablok
度质控品的回收率分别为 105.8％、101.7％、103.4％，符 回归分析结果见图2。
[6]
合标准 。 2.6.3 相关性分析结果 Spearman相关分析结果显示，
2.4 EMIT法检测霉酚酸血药浓度 荧光免疫层析法与 LC-MS/MS 法、荧光免疫层析法与
2.4.1 血液样本检测 将 Viva-E 型全自动药物浓度分 EMIT法所测霉酚酸血药浓度的相关系数分别为0.968、
析仪配套霉酚酸检测试剂盒，按照相应说明书操作进行 0.929（P＜0.000 1）。
检测。检测血清中霉酚酸的血药浓度，每次检测样本时 2.6.4 偏倚分析结果 Bland-Altman 散点图分析结果
对质控品进行平行检测。结果显示，霉酚酸线性范围为 显示，荧光免疫层析法与 LC-MS/MS 法、荧光免疫层析
0.1～15.0 µg/mL，最低定量限为0.1 μg/mL。 法与EMIT法所测霉酚酸血药浓度的差值散点均在血药
2.4.2 精密度与回收率试验 分别取低、中、高质量浓 浓度平均值水平线上下两侧分布。荧光免疫层析法与
度（1.0、7.5、12.0 μg/mL）的霉酚酸质控品，每日平行操作 LC-MS/MS 法所测霉酚酸血药浓度的差值中有 3.28％
5 次，连续检测 3 d，计算 EMIT 法检测霉酚酸的日内、日 （2/61）的差值散点在一致性界限外（±1.96SD），荧光免
间精密度 RSD 和回收率。结果显示，日内精密度 RSD 疫层析法与 EMIT 法所测霉酚酸血药浓度的差值中有
中国药房 2021年第32卷第23期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 23 ·2887 ·