Page 80 - 《中国药房》2021年23期

chromatography and EMIT was outside the consistency limit （± 1.96SD）. Wilcoxon pairing test showed that the results of
fluorescence immunochromatography were higher than those of LC-MS/MS（Z＝3.76，P＝0.000 2）and lower than those of EMIT
（Z＝－ 5.96，P＜0.000 1）. CONCLUSIONS：Fluorescence immunochromatography shows good consistency and correlation with
LC-MS/MS and EMIT；the blood concentrations of mycophenolic acid detected by fluorescence immunochromatography were
higher than those by LC-MS/MS and lower than those by EMIT. It can be used for bedside rapid detection. When using the test
results of different methods for clinical medication，the differences of test methods need to be considered.
KEYWORDS Mycophenolic acid；Blood concentration；Fluorescence immunochromatography；Liquid chromatography-tandem
mass spectrometry；Enzyme multiplied immunoassay technique

吗替麦考酚酯是临床上常用的免疫抑制剂，在体内 自德国 Siemens 公司；荧光免疫层析法霉酚酸检测试剂
代谢为活性成分霉酚酸，广泛用于实体器官移植和严重 盒（京械注准20192400221）购自北京丹大生物技术有限
的免疫性疾病。由于霉酚酸药动学个体差异大，且具有 公司。
非线性代谢特点，故需进行治疗药物监测，以反映患者 1.3 血液样本收集
体内的药物暴露量，提高药物疗效并减少毒副作用的发 收集 2020 年 8 月至 2021 年 5 月在重庆医科大学附
[1]
生 。目前，霉酚酸的检测方法以色谱法和免疫法为主， 属儿童医院住院治疗并口服吗替麦考酚酯的儿童患者
其中液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法属于前者，其结 的血液样本61份为研究样本。患者包括肾移植、肾病综
合了高效液相色谱法的高分离性和质谱的高敏感性、高 合征、红斑狼疮等自体免疫性疾病患者，所有血液样本
特异性，并可以同时监测药物及其主要代谢产物 [2－4] ，是 均在患者用药达到稳态浓度后采集，根据霉酚酸口服剂
检测霉酚酸血药浓度的“金标准”，但购买及后期维护费 型不同，采集时间点包括当次给药后0、0.5、1.0、1.5、2.0、
用昂贵。酶放大免疫（EMIT）法属于后者，自动化程度 4.0 h。本研究经重庆医科大学附属儿童医院伦理委员
高，应用广泛，但由于可将某些同系代谢物一并检测导 会批准，伦理批件号为（2020）年伦审（研）第269号。
[4]
致检测结果较LC-MS/MS法结果偏高 。荧光免疫层析 2 方法与结果
法同属于免疫法，具有即时检验方便、快捷的特点，已在 2.1 血清的制备
[5]
临床床旁快速检测中广泛应用 。目前，荧光免疫层析 待测血液样本经 3 000 r/min 离心 5 min，分离出上
法、LC-MS/MS 法、EMIT 法在各医疗机构均有使用，但 层血清备用。
患者同一份血液样本采用不同的检测方法，其结果可能 2.2 荧光免疫层析法检测霉酚酸血药浓度
存在差异，给临床药师和医师解读药物的监测结果并进 2.2.1 血液样本检测 将 D20 型多通道荧光免疫定量
行个体化治疗带来不便。因此，本研究同时采用荧光免 分析仪配套霉酚酸检测试剂盒，按相应说明书操作进行
疫层析法、LC-MS/MS 法、EMIT 法检测霉酚酸血药浓 检测。取血清10 μL，加入定量试剂盒中的缓冲液1 mL
度，比较分析3种方法检测结果的一致性与差异性，为霉 进行稀释，充分混匀5～10 s；取80 μL稀释后样本，加入
酚酸血药浓度床旁快速检测提供方法参考。 测试卡加样孔中，静置 15 min，放入分析仪中读取数
1 材料 据。结果显示，霉酚酸线性范围为 0.1～20.0 μg/mL，最
1.1 主要仪器 低定量限为0.1 μg/mL。
LC-MS2020 型高效液相色谱仪购自日本 Shimadzu 2.2.2 精密度与回收率试验 分别取低、中、高质量浓
公司；Triple Quad 4500 型质谱检测仪购自美国 Applied 度（2.5、5.0、10.0 μg/mL）的霉酚酸质控品，每日平行操作
Biosystems 公司；Viva-E 型全自动药物浓度分析仪购自 5 次，连续检测 3 d，计算荧光免疫层析法检测霉酚酸的
德国 Siemens 公司；D20 型多通道荧光免疫定量分析仪 日内、日间精密度RSD 和回收率。结果显示，日内精密
购自北京丹大生物技术有限公司。 度RSD（n＝5）分别为2.9％、7.0％、5.5％，日间精密度RSD
1.2 主要药品与试剂 （n＝5）分别为6.0％、11.4％、6.8％，低、中、高质量浓度质控
麦考酚钠肠溶片（商品名米芙，国药准字J20200010， 品的回收率分别为91.5％、103.2％、106.4％，符合标准 。
[6]
规格 180 mg）购自德国诺华制药有限公司；吗替麦考酚 2.3 LC-MS/MS法检测霉酚酸血药浓度
酯胶囊（商品名骁悉，国药准字H20031240，规格0.25 g） 2.3.1 色 谱 与 质 谱 条 件 （1）色 谱 条 件 ：色 谱 柱 为
购自上海罗氏制药有限公司；吗替麦考酚酯分散片（商 YMC-Pack-CN（氰基）C18 （50.0 mm×3.0 mm，3 μm），流动
品名赛可平，国药准字 H20052083，规格 0.25 g）购自杭 相为A相-B相（20 ∶ 80，V/V），流速为0.5 mL/min，柱温为
州中美华东制药有限公司。流动相A相和B相、样本萃 40 ℃，进样量为 15 µL。（2）质谱条件：离子源为电喷雾
取液、内标液（沪奉械备20190010号）均购自上海领沃康 离子源（ESI），离子源温度为 400 ℃，采用正离子模式，
斐医疗科技有限公司；EMIT法霉酚酸检测试剂盒（国械 屏蔽气压力为206.85 kPa，碰撞气压力为41.37 kPa，雾化
注进 20162401153）、霉酚酸质控品、霉酚酸定标液均购 气GS1、GS2压力分别为482.65、275.80 kPa，毛细管电压

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