Page 47 - 《中国药房》2021年22期

流动相体系进行了比较，结果显示，前3种流动相体系所
4
得色谱峰峰形较差且信息较少，故选择乙腈-0.1％磷酸
2
溶液（含0.04％三乙胺）为流动相。此外，本课题组还比
0
t[2] 较了不同检测波长（210、230、250、270、290 nm）下的色
－2
谱图，结果显示，当检测波长为230 nm时，所得色谱峰数
－4
量较多，能较全面、完整地反映越婢加术汤整方的化学
－6
－10 －8 －6 －4 －2 0 2 4 6 8 成分信息，虽然盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在该波长条
t[1]
图7 10批越婢加术汤的PLS-DA得分图 件下均不出峰，暂未能指认这两种成分，但鉴于中药指
Fig 7 PLS-DA scoring plot of 10 batches of Yuebi jiazhu 纹图谱的整体性，故选择检测波长为230 nm。
decoction 3.1.2 含量测定的色谱条件 本课题组前期分别对
Waters Atlantis T 3 （150 mm×4.6 mm，5 μm）、Waters XSelect
0.3
0.2 HSS T 3 （150 mm×4.6 mm，5 μm）、Hypersil BDS C 18 （250 mm×
0.1 4.6 mm，5 μm）等3种不同类型的C18色谱柱进行了考察，
0
w ＊ c[2] －0.1 结果发现，上述 C18色谱柱所得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻
－0.2
－0.3 黄碱的色谱峰峰形较差，通过参照2020年版《中国药典》
－0.4
－0.5 （一部）“麻黄”项下含量测定的色谱条件，本研究最终选
－0.6 择了麻黄专用柱（Venusil XBP Polar-Phenyl） 。同时，
[18]
－0.30 －0.20 －0.10 0
W c[1] 本课题组又对甲醇-0.1％磷酸溶液（含 0.04％三乙胺）、
＊
图8 10批越婢加术汤中20个共有峰的PLS-DA载荷图
甲醇-0.1％磷酸溶液（含0.1％三乙胺）以及甲醇-0.1％磷
Fig 8 PLS-DA loading plot of 20 common peaks in 10
酸溶液（含 0.2％三乙胺）等不同流动相体系进行了比
batches of Yuebi jiazhu decoction
较，结果发现，以甲醇-0.1％磷酸溶液（含0.04％三乙胺）
9 个共有峰的 VIP 值＞1，VIP 值由大到小依次为峰 9＞ 为流动相时，所得色谱峰峰形较好。此外，本课题组还
峰3＞峰12＞峰8＞峰19＞峰18（甘草酸铵）＞峰13＞峰 比较了不同检测波长（205、207、210、213、215 nm）下的
20＞峰11（甘草苷）。结果见图9。 色谱图，结果显示，当检测波长为210 nm时，柱效更高且
峰形更好。
3
3.2 供试品处理方法的确定
2
本课题组前期比较了越婢加术汤未经处理、甲醇溶
1
VIP值 0 解未经超声处理以及甲醇超声处理等3种方法，结果发
现，以甲醇超声处理后所得样品色谱图的杂峰较少，有
－1
－2 利于共有峰及待测成分色谱峰的分析与辨认。含量测
9 3 12 8 19 18 13 20 11 14 10 16 6 17 1 2 5 7 4 15
峰号 定供试品处理方法主要包括有机溶剂萃取法、加酸超声
图9 10批越婢加术汤中20个共有峰的VIP值 法和阳离子交换树脂法等 [24－25] ，本课题组前期参考上述
Fig 9 VIP values of 20 common peaks in 10 batches of 文献，结果发现，经阳离子交换树脂法纯化后盐酸麻黄
Yuebi jiazhu decoction 碱和盐酸伪麻黄碱能够完全分离，所得的色谱峰峰
3 讨论 形好。
3.1 色谱条件的确定 3.3 测定结果的分析
3.1.1 指纹图谱的色谱条件 本课题组前期分别对 由于盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱结构的特殊性，无
Waters Atlantis T 3 （150 mm×4.6 mm，5 μm）、Waters XSelect 法与其他活性成分在同一波长下被检出，故为尽可能体
HSS T3 （150 mm×4.6 mm，5 μm）、Hypersil BDS C18 （250 现更多成分，在指纹图谱中暂未指认上述两种成分。指
mm×4.6 mm，5 μm）等3种不同类型的C18色谱柱进行了 纹图谱结果显示，10批越婢加术汤的HPLC叠加指纹图
考察，结果发现，采用封尾的Hypersil BDS C18时，所得色 谱共有20个共有峰，其与对照指纹图谱的相似度均大于
谱峰峰形对称、分离度好且基线平稳，故选择指纹图谱 0.92。经与混合对照品对比，指认峰 11 为甘草苷，峰 18
的色谱柱为 Hypersil BDS C18。同时，本课题组对甲 为甘草酸铵。
醇-0.1％甲酸溶液、乙腈-0.1％甲酸溶液、甲醇-0.1％磷酸 由于越婢加术汤中活性成分较多，其君药麻黄中的
溶液以及乙腈-0.1％磷酸溶液（含0.04％三乙胺）等不同 主要活性成分为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱 ，并鉴于
[6]

中国药房 2021年第32卷第22期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22 ·2729 ·