Page 40 - 《中国药房》2021年22期

140 2 表2 兔血浆中迷迭香酸等3种成分定量分析的精密度
120
100 1 与准确度试验结果
80
mAU 60 3
40 Tab 2 Results of precision and accuracy tests for
20
0 quantitative analysis of 3 components such as
0 5 10 15 20 rosmarinic acid in rabbit plasma
t，min
A.混合对照品溶液 理论质量浓度， 实测质量浓度 日内RSD 日间RSD RE（n＝6），
待测物
80 μg/mL （x±s），μg/mL （n＝6），％ （n＝3），％ ％
60 3 迷迭香酸 1 1.09±0.06 5.5 6.3 8.6
mAU 40 2 3 2.96±0.14 4.7 4.5 5.6
20 50 51.19±2.25 4.4 4.0 7.8
1
0 300 294.49±5.62 1.9 6.5 5.6
0 5 10 15 20 咖啡酸 1 1.07±0.07 6.5 5.6 6.2
t，min 3 2.93±0.10 3.4 4.9 5.9
B.中质量浓度供试品+兔血浆的超滤液样品
50 50.95±1.60 3.1 5.9 6.3
100
300 295.44±4.81 1.6 5.6 6.2
80
绿原酸 1 1.06±0.07 6.6 6.9 5.9
60
mAU 40 3 2.79±0.10 3.6 5.6 6.9
20 50 48.73±1.56 3.2 6.8 8.2
0 300 293.68±8.36 2.8 4.8 5.1
0 5 10 15 20
t，min 均小于10％，表明各混合质控样品在上述条件下的稳定
C. PBS+兔血浆的超滤液样品 性良好。
注：1.绿原酸；2.咖啡酸；3.迷迭香酸
2.7 血浆蛋白结合率的测定
Note：1. chlorogenic acid；2. caffeic acid；3. rosmarinic acid
图 1 兔 血 浆 中 迷 迭 香 酸 等 3 种 成 分 定 量 分 析 的 精密吸取“2.4”项下低、中、高质量浓度的供试品溶
UHPLC图 液各200 μL，分别置于2 mL离心管中，加入兔血浆300 μL，
Fig 1 UHPLC chromatograms for quantitative analy- 涡旋 30 s 使混合均匀，于 37 ℃水浴中孵育 40 min，取孵
sis of 3 components such as rosmarinic acid in 育液 0.5 mL 转移至超滤离心管中，以 14 000×g 离心 10
rabbit plasma min，取超滤液按“2.5”项下色谱条件进样分析，记录峰
面积，代入随行回归方程计算超滤液中迷迭香酸、咖啡
表1 兔血浆中迷迭香酸等3种成分定量分析的回归方
酸、绿原酸的质量浓度，并根据下列公式计算血浆蛋白
程、线性范围和定量下限考察结果
结合率：血浆蛋白结合率（％）＝（供试品溶液中待测物
Tab 1 Results of regression equation，linear range
的质量浓度－超滤液中待测物的质量浓度）/供试品溶液
and lower limit of quantitative analysis of 3
中待测物的质量浓度×100％。每个质量浓度平行操作3
components such as rosmarinic acid in rabbit
份。连钱草中迷迭香酸等3种成分的兔血浆蛋白结合率
plasma
测定结果见表3。
待测物 回归方程 R 2 线性范围，μg/mL 定量下限，μg/mL
迷迭香酸 y＝15.792 x－48.111 0.996 4 1～300 1 表3 连钱草中迷迭香酸等3种成分的兔血浆蛋白结合
咖啡酸 y＝29.748 x－109.920 0.995 1 1～300 1 率测定结果（n＝3）
绿原酸 y＝17.601 x－65.475 0.994 7 1～300 1
Tab 3 Results of plasma protein binding rate of 3
考察日内精密度；连续测定3 d，考察日间精密度。以实 components such as rosmarinic acid from G.
测质量浓度与理论质量浓度的相对误差（RE）来考察准 longituba in rabbit（n＝3）
确度。兔血浆中迷迭香酸等3种成分定量分析的精密度 供试品中的质量浓度， 超滤液中的质量浓度 血浆蛋白结合率
待测物
与准确度试验结果见表2。 μg/mL （x±s），μg/mL （x±s），％
迷迭香酸 156.8 3.51±0.34 97.78±1.67
2.6.4 稳定性试验 取“2.3”项下低、中、高质量浓度（3、
209.0 11.87±1.92 94.32±1.42
50、300 μg/mL）的混合质控样品各 9 份，于 37 ℃水浴中 261.3 12.64±1.98 95.12±1.51
孵育 40 min，取孵育液 0.5 mL 转移至超滤离心管中，以 咖啡酸 93.2 9.21±1.69 90.12±2.33
14 000×g 离心 10 min，取超滤液，分别置于 4 ℃下冷藏 124.2 12.91±1.84 89.53±1.98
155.3 15.17±1.78 90.23±1.56
24 h、室温下放置 12 h、反复冻融（－20～25 ℃）3 次后，
绿原酸 43.5 15.99±0.86 63.23±2.12
按“2.5”项下色谱条件进样分析，考察稳定性。结果显 58.0 18.64±0.79 67.87±1.06
示，上述条件下迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸峰面积的RSD 72.5 27.30±1.25 62.34±1.34

·2722 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22 中国药房 2021年第32卷第22期