Page 39 - 《中国药房》2021年22期
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供参考。                                               贮备液适量，加入兔空白血浆稀释，制成质量浓度分别
        1 材料                                               为 1、3、50、300 μg/mL的混合质控样品。
        1.1 主要仪器                                           2.4 供试品溶液的配制
            本研究所用主要仪器包括1290 Infinity 型UHPLC                    取连钱草药材，粉碎，过四号筛，精密称取粉末1.0 g，
                                             TM
        仪及配备的二元高压梯度泵、柱温箱、自动进样器、二极                          置于具塞锥形瓶中，精密加入 PBS 20 mL，超声（功率
        管阵列检测器、ChemStation C.01.03 工作站（美国 Agi-             500 W，频率40 kHz）处理30 min，滤过，即得连钱草提取
        lent 公司），Milli-Q Direct16 型超纯水仪（美国 Millipore       液（参考文献[12]采用高效液相色谱法测定，迷迭香
        公司），Amicon Ultra-0.5 10K型超滤离心管（截留分子量               酸、咖啡酸、绿原酸的质量浓度分别为 261.3、155.3、
        10 000 Da，德国 Merck 公司），Micro 17 型台式高速离心            72.5 μg/mL），作为高质量浓度的供试品溶液。精密吸取
        机（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Vortex WX 型涡     上述提取液3、4 mL，分别置于5 mL量瓶中，加PBS稀释
        旋混合器（意大利VELP公司），Transferpette S型微量移                至刻度，摇匀，分别作为低、中质量浓度的供试品溶液
        液器（德国 Brand 公司），BP225D 型电子天平[赛多利斯                  （低质量浓度的供试品溶液中迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸
        科学仪器（北京）有限公司]，HH-6型数显恒温水浴锅[国                       的质量浓度分别为 156.8、93.2、43.5 μg/mL，中质量浓度
        华（常州）仪器制造有限公司]等。                                   的供试品溶液中迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸的质量浓度
        1.2 主要药品与试剂
                                                           分别为209.0、124.2、58.0 μg/mL）。
            连钱草采自江西省九江市，经江西省药品检验检测
                                                           2.5 色谱条件
        研究院周国平主任中药师鉴定为唇形科植物活血丹
                                                               以 Phenomenex Luna C18 （150 mm×2 mm，3 μm）为
                                                                                 ®
        G. longituba（Nakai）Kupr.的干燥地上部分；迷迭香酸对
                                                           色谱柱，以乙腈（A）-0.1％甲酸溶液（B）为流动相进行梯
        照品（批号 111871-202007，纯度 98.1％）、咖啡酸对照品
                                                           度洗脱（0～1.0 min，5％A；1.0～20.0 min，5％A→21％A）；
       （批号110885-200102，纯度＞99.9％）、绿原酸对照品（批
                                                           流速为 0.5 mL/min；柱温为 45 ℃；检测波长为 327 nm；
        号 110753-202018，纯度 96.1％）均购自中国食品药品检
                                                           进样量为3 μL。
        定研究院；乙腈（色谱纯）购自美国 Sigma-Aldrich 公司；
                                                           2.6  方法学考察
        甲酸（色谱纯）购自美国TEDIA公司；其余试剂均为分析
                                                           2.6.1  专属性试验       取混合对照品溶液（溶剂为70％甲
        纯或实验室常用规格，水为超纯水。
                                                           醇，迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸的质量浓度分别为185.0、
        1.3  实验动物
                                                           224.2、156.0 μg/mL）、“2.7”项下中质量浓度供试品+兔血
            本研究所用动物为普通级新西兰兔，雌雄各半，体
                                                           浆的超滤液样品、PBS+兔血浆的超滤液样品（即空白样
        质量为 2.5～3.0 kg，购自赣州市畜牧研究所，实验动物
                                                           品）各适量，按“2.5”项下色谱条件进样分析，记录色谱
        生产许可证号为 SCXK（赣）2018-0009。本研究方案符
                                                           图。结果显示，迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸色谱峰的分离
        合动物实验的相关伦理要求。
        2 方法                                               度良好，内源性物质对测定无干扰，表明本方法专属性
                                                           良好。兔血浆中迷迭香酸等3种成分定量分析的超高效
        2.1  血浆采集
                                                           液相色谱图见图1。
            取新西兰兔耳动脉血，置于肝素钠一次性采血管中，
                                                           2.6.2  线性关系和定量下限考察             取“2.3”项下混合对
        以 1 000×g 离心 3 min，取上清液，即得血浆，于－18 ℃
        下冷冻，备用。                                            照品系列溶液，于 37 ℃水浴中孵育 40 min，取孵育液
        2.2 磷酸盐缓冲液的配制                                      0.5 mL 转移至超滤离心管中，以 14 000×g 离心 10 min，
            分别称取氯化钠 8.00 g、氯化钾 0.20 g、磷酸氢二钠                取超滤液按“2.5”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。
        1.44 g、磷酸二氢钾0.24 g，置于1 000 mL量瓶中，加水溶               以待测物的质量浓度（x）为横坐标、峰面积（y）为纵坐
        解并稀释至刻度，摇匀，用 0.5％氢氧化钠溶液调 pH 为                      标，分别拟合迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸的回归方程，并
        7.4，即得磷酸盐缓冲液（PBS）。                                 以线性范围下限作为待测物的定量下限。兔血浆中迷
        2.3 混合对照品系列溶液和混合质控样品的配制                            迭香酸等3种成分定量分析的回归方程、线性范围和定
            分别称取迷迭香酸、咖啡酸、绿原酸对照品各10.0 mg，                   量下限考察结果见表1。
        加 70％甲醇溶解并稀释，制成上述成分质量浓度均为                          2.6.3  精密度与准确度试验           取“2.3”项下定量下限质
        1 mg/mL 的混合对照品贮备液。精密吸取上述混合对                        量浓度（1 μg/mL）以及低、中、高质量浓度（3、50、300
        照品贮备液适量，加入兔空白血浆超滤液稀释，制成质                           μg/mL）的混合质控样品适量，于37 ℃水浴中孵育40 min，
        量浓度分别为 1、3、10、25、50、100、200、300、400 μg/mL          取孵育液0.5 mL转移至超滤离心管中，以14 000×g离心
        的混合对照品系列溶液。另精密吸取上述混合对照品                            10 min，取超滤液按“2.5”项下色谱条件连续进样 6 次，


        中国药房    2021年第32卷第22期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22  ·2721 ·
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