Page 82 - 《中国药房》2021年21期
P. 82

and decreasing the expression of inflammatory factors TNF-α，IL-1β，IL-6.
        KEYWORDS Trillium tschonoskii total saponins；Arthritis；NOD-like receptor protein 3；Anti-inflammation；Rats

            类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以滑            样蛋白（ASC）多克隆抗体（美国 Affinity 公司，批号
        膜炎为主要特征的自身免疫性疾病，临床主要表现为疼                            DF6304），兔源 NLRP3 单克隆抗体（武汉爱博泰克生物
        痛、肿胀、关节僵硬、发热、乏力等，甚至有些患者表现出                          科技有限公司，批号 A5652），兔源胱天蛋白酶 1（cas-
                               [1]
        不可逆转的生理功能障碍 。RA 的发病过程涉及肿瘤                           pase-1）P10多克隆抗体（10/45 kDa）（北京博奥森生物技
        坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素 6（IL-6）、IL-1β等多种                 术有限公司，批号 bs-20617R），辣根过氧化物酶标记的
        炎症因子，但其具体发病机制尚不明确 。相关研究发                            羊抗兔免疫球蛋白G二抗（武汉博士德生物工程有限公
                                          [2]
        现，RA患者外周血的单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞                           司，批号BA1054）；其余试剂为实验室常用规格，水为纯
        中的 NOD 样受体蛋白 3（NOD-like receptor protein 3，         净水。
                         [3]
        NLRP3）的表达上调 。                                       1.3 动物
            延龄草别名“头顶一颗珠”，为百合科植物，是神农                             本研究所用动物为 SPF 级雄性 SD 大鼠，体质量
        架四大名药之一，其根茎具有化瘀、解毒、除风湿等功                            180～200 g，购自三峡大学动物实验中心，动物生产许可
                                            [4]
        效，可用于治疗软组织损伤、外伤出血等 ，其主要活性                           证 号 为 SCXK（鄂）2017-0012。 动 物 饲 养 于 室 温 为
                                 [5]
        成分为延龄草总皂苷（TTM） 。经本课题组前期研究发                          25 ℃、相对湿度为40％～70％的环境中，经适应性喂养
        现，TTM 具有明显的抗炎活性，对小鼠足肿胀具有显著                          后进行实验。实验过程符合三峡大学实验伦理委员会
                   [6]
        的治疗效果 。但是，TTM是否具有改善AA的作用，尚                          的相关要求。
        不明确。                                                2 方法
            胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）        2.1  造模、分组与给药
        和佐剂性关节炎（adjuvant-induced arthritis，AA）模型在               将大鼠按照随机数字表法分为造模组（n＝44）和空
        RA动物模型中均应用广泛：CIA模型常用于RA的免疫                          白组（n＝6）。造模组大鼠右足趾处注射完全弗氏佐剂
        机制研究，AA模型常用于RA药物疗效研究                 [7－8] 。且相较     0.1 mL以致炎 ；注射后第7天，在大鼠右侧尾部皮下注
                                                                        [10]
        于 CIA 模型，AA 模型具有成模率高、造模时间短、操作                       射完全弗氏佐剂 0.1 mL 来加强免疫，以复制 AA 模型。
        简单等优点 ，故本研究选择建立 AA 模型大鼠，探究                          空白组大鼠同法注射等体积生理盐水。注射10 d后，造
                   [9]
        TTM对关节炎的改善作用及机制，以期为TTM治疗RA                          模组大鼠参考“0～4级关节炎性评分办法”对其双侧后
        提供参考。                                               足关节进行炎性评分 ：0 分为无肿胀和红斑；1 分为踝
                                                                               [11]
        1 材料                                                关节出现红斑和轻度肿胀；2 分为踝关节到跖关节或掌
        1.1  主要仪器                                           关节出现红斑和轻度肿胀；3 分为踝关节到跖趾关节或
            本研究所用主要仪器有C2500-R-230V型微型高速                     掌关节出现红斑和中度肿胀；4 分为踝关节到趾关节出
        离心机（美国 Labnet 公司）、ICV-450 型电热恒温培养箱                  现红斑和重度肿胀。当大鼠双侧（右侧为原发侧，左侧
        （日本 Asone 公司）、Flexstation 3 型多功能酶标仪（美国              为继发侧）足关节累计评分大于4时，则表明造模成功。
        Molecular Devices 公司）、DYY-7C 型电泳仪（北京六一              剔除造模不成功大鼠 14 只，将造模成功的 30 只大鼠随
        仪器厂）、BX53型生物显微镜（日本Olympus公司）。                       机分为模型组、雷公藤多苷片组（40 mg/kg，剂量参考文
        1.2  主要药品与试剂                                        献[12]设置）和TTM低、中、高剂量组（50、100、200 mg/kg，
            本研究所用 TTM 由本实验室自制（112.96 g/kg，以                 剂量根据本课题组前期研究结果设置                 [13－15] ），每组 6 只。
        生药量计）。其他药品与试剂有：雷公藤多苷片（浙江得                           各给药组大鼠灌胃相应药物[临用时均以羧甲基纤维素
        恩德制药有限公司，国药准字Z33020422，规格10 mg），                    钠溶液（以生理盐水为溶剂）溶解]，空白组和模型组大
        TNF-α、IL-6、IL-1β的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒                 鼠灌胃生理盐水，灌胃体积为0.01 mL/g，每天1次，连续
        （武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号分别为                             9 d。
        E-EL-R2856c、E-EL-R0015c、E-EL-R0012c），水合氯醛           2.2 大鼠体质量、足肿胀度、关节炎性评分的检测
        （广东光华科技股份有限公司，批号 20100926），完全弗                          末次灌胃后，称定各组大鼠体质量，并采用游标卡
        氏佐剂、4％多聚甲醛、苏木精-伊红（HE）染色液（美国                         尺测量大鼠双侧后足踝关节同一位点（右侧为原发侧，
        Sigma 公 司 ，批 号 分 别 为 F5881-10、158127、H9627），        左侧为继发侧）的厚度，平行测量3次，取平均值，并计算
        BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公                           足肿胀度（足肿胀度＝灌胃后大鼠踝关节厚度的平均
        司，批号P0010），兔源GAPDH多克隆抗体（杭州贤至生                       值－造模前大鼠踝关节厚度的平均值）。另外，按照“2.1”
        物科技有限公司，批号AB-P-R001），兔源凋亡相关斑点                       项下方法对灌胃后大鼠双侧后足关节进行炎性评分。


        ·2636 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 21                                 中国药房    2021年第32卷第21期
   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87