Page 74 - 《中国药房》2021年21期

即得。（2）混合对照品溶液的制备：取茵芋苷、7-羟基香 2.7.3 线性关系考察 分别精密吸取“2.7.1（2）”项下混
豆素和 7-羟基-8-甲氧基香豆素对照品各适量，精密称 合对照品贮备液 0.2、0.6、1.0、2.0、4.0、6.0 mL，分别置于
定，加甲醇制成每 1 mL 含茵芋苷 304.4 μg、7-羟基香豆 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀，得茵芋苷
素 78.4 μg 和 7-羟基-8-甲氧基香豆素 54.8 μg 的溶液，作 （6.088、18.264、30.440、60.880、121.760、182.640 μg/mL）、
为混合对照品贮备液。精密吸取上述混合对照品贮备 7- 羟 基 香 豆 素（1.568、4.704、7.840、15.680、31.360、
液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含茵芋 47.040 μg/mL）、7-羟基-8-甲氧基香豆素（1.096、3.288、
苷30.44 μg、7-羟基香豆素7.84 μg和7-羟基-8-甲氧基香 5.480、10.960、21.920、32.880 μg/mL）系列混合对照品溶
豆素5.48 μg的溶液，作为混合对照品溶液。 液，按“2.7.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以
2.7.2 色 谱 条 件 与 系 统 适 用 性 试 验 以 Waters 峰面积为纵坐标（Y）、待测成分的质量浓度为横坐标（X）
XBridge C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以乙腈 进行线性回归，结果如表 3 所示。由表 3 可知，3 种待测
®
（A）-0.1％磷酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～45 成分在各自的质量浓度范围内与峰面积成良好的线性
min，5％A→30％A；45～46 min，30％A→5％A；46～60 关系。
min，5％A）；检测波长为320 nm；流速为1 mL/min；柱温 表3 茵芋苷等3种待测成分的线性关系考察结果
为25 ℃；进样体积为10 μL。 Tab 3 Results of linear relationship of 3 components
分别精密吸取“2.7.1”项下混合对照品溶液、供试品 such as skimmin
溶液（编号S1）和空白对照（80％甲醇）适量，按上述色谱 待测成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL
茵芋苷 Y＝19 927X+2 894.2 0.999 7 6.088～182.640
条件进样测定，记录色谱图（图 6）。结果显示，茵芋苷、 7-羟基香豆素 Y＝41 948X－61.7 0.999 7 1.568～47.040
7-羟基香豆素和 7-羟基-8-甲氧基香豆素的分离度均大 7-羟基-8-甲氧基香豆素 Y＝49 309X+7 763.9 0.999 8 1.096～32.880
于1.5，理论板数均不低于8 000；空白对照不干扰测定。 2.7.4 精密度试验 取“2.7.1（2）”项下混合对照品溶液
适量，按“2.7.2”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰
0.08 1
面积。结果显示，茵芋苷、7-羟基香豆素和 7-羟基-8-甲
0.06
2
AU 0.04 氧基香豆素峰面积的RSD分别为0.23％、0.43％、0.36％
0.02 3 （n＝6），表明仪器精密度良好。
0 2.7.5 稳定性试验 取同一供试品溶液（编号S1）适量，
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60
t，min 按“2.7.2”项下色谱条件分别于室温下放置0、2、4、8、12、
A.混合对照品溶液 24 h时进样测定，记录峰面积。结果显示，茵芋苷、7-羟
0.08 1
基香豆素和7-羟基-8-甲氧基香豆素峰面积的RSD分别
0.06
2 为 1.21％、1.24％、1.34％（n＝6），表明供试品溶液在室
AU 0.04
温下放置24 h内稳定性良好。
0.02
3
2.7.6 重复性试验 取同一批样品粉末（编号 S1）约
0
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 0.5 g，共6份，精密称定，分别按“2.7.1（1）”项下方法制备
t，min 供试品溶液，再按“2.7.2”项下色谱条件进样测定，记录
B.供试品溶液（编号S1）
0.08 峰面积，以外标法计算样品含量。结果显示，茵芋苷、7-
0.06 羟基香豆素和 7-羟基-8-甲氧基香豆素的平均含量分别
AU 0.04 为 6.061、1.585、1.086 mg/g，RSD 分别为 0.71％、1.05％、

0.02 1.48％（n＝6），表明本方法重复性良好。
0 2.7.7 加样回收率试验 精密称取同一批已知含量的
0 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60
t，min 样品粉末（编号 S1）约 0.25 g，共 6 份，精密加入“2.7.1
C.空白对照 （2）”项下混合对照品贮备液 5 mL，按“2.7.1（1）”项下方
注：1.茵芋苷；2.7-羟基香豆素；3.7-羟基-8-甲氧基香豆素
法制备供试品溶液，再按“2.7.2”项下色谱条件进样测
Note：1. skimmin；2. 7-hydroxycoumarin；3. 7-hydroxy-8-me-
thoxycoumarin 定，记录峰面积并计算加样回收率，结果如表4所示。由
图 6 混合对照品溶液、供试品溶液及空白对照的 表4可知，本方法准确度良好。
HPLC图 2.7.8 耐用性试验 （1）不同色谱柱：分别采用 Waters
Fig 6 HPLC chromatograms of mixed control solu- XBridge C18、Waters SunFire C18 和 Agilent ZORBAX
®
®
tion，test sample solution and blank control Eclipse XDB-C18 等 3 种不同色谱柱（规格均为 250 mm×

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