Page 102 - 2021年19期
P. 102
2.1.4 替考拉宁检测的色谱条件 以Aston SRC、Aston 定量下限测定结果见表1。
SN和Aston SCB为色谱柱；以水-乙腈（78 ∶ 22，V/V）为一 2.5.3 准确度试验 分别取“1.3”项下伏立康唑、利奈唑
维泵流动相，流速为 0.8 mL/min；以乙腈-BPI-1-API-1 胺、万古霉素和替考拉宁的3个不同浓度水平的质控品，
（37∶23∶40，V/V/V）为二维泵流动相，流速为1.2 mL/min； 每个浓度水平的质控品均平行5份操作，按“2.4”项下方
开始运行的0.01～0.80 min为初级样品分离时间，2.00～ 法进行前处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记
4.00 min 为目标组分捕获时间，4.00～15.00 min 为目标 录峰面积并计算回收率。结果，伏立康唑、利奈唑胺、万
组分检测时间；检测波长为282 nm；采集频率为1.67 Hz。 古霉素和替考拉宁的准确度为93.51％～101.56％，表明
2.2 血浆标本的分组 该方法的准确度较好。准确度试验结果见表2。
因按照实验室常规标本检测方法完成血浆中药物 2.5.4 精密度试验 取“1.3”项下伏立康唑、利奈唑胺、
浓度检测后，单个患者剩余的含药血浆量有限，故本研 万古霉素和替考拉宁3个不同浓度水平的质控品，每个
究参照已测血药浓度结果，将所有剩余的血浆标本按照 浓度水平均平行5份操作，按“2.4”项下方法进行前处理
药物浓度的高低以3份一组的方式分别合并为低、中、高 后，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，考察日
3 个浓度水平的混合标本，然后将每个浓度水平的混合 内精密度；重复实验3 d，考察日间精密度。结果，日内、
标本又分为灭活组和非灭活组，每组3份。将全部标本 日间精密度试验的 RSD 均小于 5.0％（n＝5 或 n＝3），表
编号后，置于－80 ℃冰箱中保存，备用。 明该方法精密度良好。
2.3 血浆标本的灭活 2.6 灭活处理血浆标本对血药浓度检测结果的影响
将分别含伏立康唑、利奈唑胺、万古霉素和替考拉 取灭活和未灭活处理的所有血浆样本，分别按“2.4”
宁的血浆标本在室温下解冻，待血浆完全解冻后，把灭 项下方法进行前处理后，再分别按“2.1”项下色谱条件进
活组 3 个浓度水平的 36 份血浆分别转移至与干式恒温 样测定，记录峰面积并根据标准曲线计算出各药物的血
器匹配的玻璃管中，然后用干式恒温器以 56 ℃加热 30 药浓度。每测定10个标本，随行测定任意2个不同质量
min 进行灭活。非灭活组的 36 份血浆在解冻后不进行 浓度的质控品，以保证结果的准确性。结果显示，相较
灭活处理。 于非灭活组，灭活组低、中、高浓度水平血浆样本中伏立
2.4 血浆标本的前处理 康唑、利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁的血药浓度水平
准确吸取血浆标本 200 μL 至 2 mL EP 管中，加入 的相对误差均小于 15％，提示采用 56 ℃干式恒温金属
ACP-1去蛋白剂600 μL，涡旋振荡1 min，然后再以14 000 浴加热30 min的方式灭活对血浆样本中上述4种药物血
r/min离心8 min；取离心后的上清液650 μL至1.5 mL进 药浓度检测结果的影响较小，详见表3。
样瓶中，加入ACG保护剂65 μL，振荡摇匀。 3 讨论
2.5 血浆中4种药物浓度检测的方法学考察 伏立康唑、利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁血药浓
2.5.1 系统适用性试验 取空白人血浆、4 种药物的校 度检测方法包括高效液相色谱法、高效液相色谱-串联
准品、空白人血浆与 4 种药物校准品的混合液，分别按 质谱法、酶联免疫法、微生物法等 [21－23] 。二维液相色谱
“2.4”项下方法进行前处理后，按“2.1”项下色谱条件进 法因具有峰容量大、选择性高和分离能力强等优势 ，
[24]
行测定，记录色谱图。结果显示，伏立康唑、利奈唑胺、 在临床上应用也日渐广泛。本实验室采用二维液相色
万古霉素、替考拉宁色谱峰的保留时间分别为 8.50、 谱法检测伏立康唑等 4 种临床常用抗菌药物的血药浓
8.59、8.02、8.23 min；血浆中的内源性物质和其他杂质均 度，其分析方法、仪器及使用的相关试剂均为整套订购，
不干扰 4 种药物的分离、测定；待测物色谱峰的峰形对 仪器公司在开发分析方法时已做过完整的方法学验
称、特异性较好。色谱图见图1。 证。本研究将该分析方法转移到本实验室后，只有实验
2.5.2 线性关系及定量下限考察 分别取“1.3”项下伏 室环境发生了小幅的改变。2020 版《中国药典》（四部）
立康唑、利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁不同浓度水平 “生物样品定量分析方法验证指导原则”中提到，在对已
的6个校准品和3个质控品，按“2.4”项下方法进行前处 被验证的分析方法进行小幅改变的情况下，根据改变的
理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。 实质内容（包括将生物分析方法转移到另一实验室、改
以血药浓度为纵坐标（y）、峰面积为横坐标（x）绘制标准 变仪器、改变校正范围浓度等），可能需要部分方法验
[25]
曲线。结果显示，伏立康唑、利奈唑胺、万古霉素和替考 证 。因此，本实验室只对系统适用性、线性关系、准确
拉宁分别在质量浓度 0.48～11.88、1.28～18.81、2.02～ 度和精密度等几个部分进行了方法学验证。验证结果
48.73、5.01～125.20 μg/mL 范围内与其峰面积的线性关 表明，该二维液相色谱法在本实验室环境下检测伏立康
系良好（R 均大于0.999 0）。标准曲线方程、线性范围及 唑、利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁血药浓度的适用性、
2
·2396 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19 中国药房 2021年第32卷第19期
