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20（S）-原人参二醇[20（S）-PPD，以下简称“PPD”]为 1.3 空白血浆
二醇型人参皂苷的苷元，是稀有人参二醇皂苷 Rd、F2、 人空白血浆和空白全血均从健康受试者中采集（伦
Rg3、CK、Rh2的主要活性代谢产物 ，具有抗癌、抗抑郁、 理批件号快 LS2017120502），溶血血浆采用空白血浆+
[1]
止血、激活氯离子通道和抑制钠离子通道去极化等诸多 空白全血配制而成（全血体积占比为 2％），高脂血浆
药理活性 [2－5] 。有报道称，人参皂苷CK在体内和体外均 采用空白血浆+三酰甘油配制而成（三酰甘油含量≥3
可被胃酸和/或肠道微生物进一步分解并转化为PPD，且 mg/mL）。
[6]
PPD为二醇型人参皂苷活性最强的代谢产物 。对于人 2 方法与结果
参皂苷 CK 等二醇型人参皂苷的临床药动学研究而言， 2.1 色谱条件
准确、快速测定生物样品中PPD的浓度极为重要。 以 Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm × 50
虽然，目前已有报道采用液相色谱-串联质谱法 mm，1.8 µm）为色谱柱，以 5 mmol/L 碳酸氢铵溶液（A）-
（LC-MS/MS）检测血浆中 PPD 的浓度，但大多数文献的 乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～0.5 min，60％A；
前处理方法复杂，如液液萃取法 [7－12] 、固相萃取法 、柱 0.5～2.5 min，60％A→15％A；2.5～3 min，15％A，3～4
[13]
[14]
前衍生化法 、基于 C8-修饰内孔壁的磁性核-介孔壳微 min，15％A→60％A）；流速为0.4 mL/min；柱温为40 ℃；
[15]
球制备法 等；也有文献采用蛋白沉淀法进行前处理， 自动进样器温度为10 ℃；进样量为10 μL。
但其定量下限过高，且方法学验证不够全面 [16－17] 。随着 2.2 质谱条件
临床试验伦理审核要求以及生物分析法规的不断提高 离子源为ESI，以多反应监测模式（MRM）进行负离
和完善，文献报道的方法已经很难满足临床试验批量样 子扫描，具体质谱参数见表1。
[18]
品检测和现阶段法规的要求 。基于此，本研究采用蛋 2.3 溶液制备
白沉淀法对血浆样品进行前处理，再结合超高效液相色 2.3.1 PPD 标准溶液和质控溶液 称取 PPD 对照品适
谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定人血浆中PPD的质 量，用50％乙腈溶解并稀释，制成质量浓度为0.500 mg/mL
量浓度，并成功将此法应用于人参皂苷CK片的临床ⅠB 的贮备液。取该贮备液适量，用 50％乙腈稀释，制成质
期研究，现报道如下。 量浓度分别为 600、480、240、120、60、30、10、5 ng/mL 的
1 材料 系列标准溶液和质量浓度分别为450、90、15、5 ng/mL的
1.1 主要仪器 质控溶液。
本研究所用主要仪器包括ACQUITY UPLC Ⅰ-Class 2.3.2 内标工作液 称取内标对照品适量，用50％乙腈
型超高效液相色谱（UPLC）仪（美国 Waters 公司），AB 溶解并稀释，制成质量浓度为 0.200 mg/mL 的贮备液。
Sciex 6500+型三重四极杆质谱仪及配备的电喷雾离子 取该贮备液适量，用乙腈（沉淀剂）稀释，制成质量浓度
源（ESI）、Analyst 1.6.3 数据处理软件（美国 Applied Bio- 为10 ng/mL的内标工作液。
system 公司），MSA6.6S.CE 型百万分之一电子天平（德 2.4 血浆样品前处理
国Sartorius公司），MilliQ Direct 8型超纯水仪（美国Mil- 取血浆样品 200 µL，加入内标工作液（空白样品以
lipore公司），ST16R型离心机（美国Thermo Fisher Scien- 乙腈替代）600 µL，振荡30 s，以13 500 r/min离心8 min，
tific公司），Talboys型数显多管式涡旋振荡器（美国Tro- 取上清液进样分析。
emner公司）等。 2.5 专属性考察
1.2 主要药品和试剂 取6份不同来源的空白血浆，按“2.4”项下方法处理
人参皂苷 CK 片（规格 50 mg）由浙江海正药业股份 后，再按“2.1”“2.2”项下条件进样分析，得图1A；另取不
有限公司提供；PPD 对照品（批号 111747-201602，纯度 同来源的空白血浆各 190 µL，精密加入 PPD 标准溶液
96.6％）、非那雄胺对照品（内标，批号100611-201302，纯 （5 ng/mL）10 µL，涡旋混匀，按“2.4”项下方法处理后，进
度99.6％）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱 样分析，得图 1B。另取受试血浆（给药后 24 h 采集）适
纯）、乙腈（色谱纯）均购自德国 Merck 公司；碳酸氢铵 量，按“2.4”项下方法处理后，进样分析，得图1C。由图1
（分析纯）购自天津科密欧化学试剂有限公司；其余试剂 可见，PPD 和内标的分离度良好，内源性物质对其定量
均为实验室常用规格或分析纯，水为超纯水。 分析无干扰，表明本方法专属性良好。
表1 PPD及内标的质谱参数
Tab 1 Mass spectrum parameters of PPD and internal standard
待测成分 母离子m/z 子离子m/z 去簇电压，V 碰撞能量，eV 扫描时间，ms 碰撞气压力，psi 气帘气压力，psi 离子源气体1压力，psi 离子气体源2压力，psi 离子喷雾电压，V
PPD 459.40 375.20 －140 －41 100 11 35 70 70 －4 500
内标 371.30 315.30 －100 －42 100 11 35 70 70 －4 500

中国药房 2021年第32卷第18期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 ·2249 ·