Page 82 - 2021年18期
P. 82

表4 3个剂量组受试者给药第1天和第84天PPD的药动学参数
              Tab 4 Pharmacokinetic parameters of PPD on the 1st and 84th day of administration in 3 dose groups
                             人参皂苷CK片100 mg组（n＝6）         人参皂苷CK片200 mg组（n＝5）          人参皂苷CK片300 mg组（n＝5）
         药动学参数
                            第1天          第84天           第1天           第84天           第1天           第84天
         cmax （x±s），ng/mL  4.76±4.68    18.06±10.97    3.50±6.86     30.03±23.20   4.25±4.79     27.00±8.82
         tmax[中位数（上限～下限）]，h  24.0（12.0～24.0）  12.0（5.0～24.0）  12.0（8.0～24.0）  6.0（1.5～8.0）  24.0（1.5～24.0）  12.0（3.5～24.0）
         AUC0-t （x±s），ng·h/mL  62.39±61.70  622.52±594.62  56.96±70.85  668.15±498.97  26.47±24.50  1 155.97±509.17
         t1/2 （x±s），h                   21.93±7.26                   23.96±4.79                  31.56±5.22
         V/F（x±s），L                    12 952.76±5 881.34          37 727.07±44 892.22         29 053.97±12 485.72
         CL/F（x±s），L/h                  448.40±20.59               1 120.96±1 255.84             635.12±244.04
        3 讨论                                                基质的影响；其次，筛选合适的内标，通过比较地高辛、

        3.1 流动相的选择                                          地塞米松、氯唑沙宗、非那雄胺等多个化合物，最终确定
            PPD 采用负离子模式检测，一般情况下，碱性流动                        非那雄胺最为合适；最后，在满足测定条件的前提下尽
        相有利于其离子化，但碱性条件不利于化合物与基质中                            可能增加沉淀剂体积，一般情况下沉淀剂乙腈-血浆体
        的酸性物质分离，容易出现明显的基质效应。所以在方                            积比超过 1.5 ∶ 1 即可满足蛋白沉淀的要求，但在这种情
        法建立的过程中，本课题组分别对酸性流动相、碱性流                            况下基质的影响也较大，所以本方法采用乙腈-血浆体
        动相进行了考察。结果显示，在酸性流动相条件下，                             积比3∶1进行沉淀，以进一步减小基质的影响。
        PPD 的检测受基质影响较小，但响应也明显减弱，定量                          3.4 定量方法的应用
        下限无法满足检测要求；在碱性流动相条件下，所得色                                不同剂量人参皂苷 CK 片在 RA 患者体内的药动学
        谱峰的响应较强，噪音明显弱于酸性流动相，并且基质                            试验结果均表明，与给药第 1 天比较，代谢产物 PPD 在
        效应满足检测要求。另外，在碱性流动相的选择中，本                            多剂量给药第 84 天时的 cmax和 AUC0-t均明显增加，tmax明
        课题组还分别考察了氨水和碳酸氢铵作为pH调节剂的                            显缩短，说明 PPD 在体内可能存在蓄积现象，与已有文
        效果。结果显示，当用氨水作为pH调节剂时，随着分析                           献[20]报道相符。
        批进样数量的增加、进样时间的延长，PPD 的出峰时间                              本研究建立的 PPD 定量分析方法按照国内外相关
        和响应均不稳定，其原因可能是流动相中氨水挥发，导                            指导原则    [18，21－22] 进行了完整的方法学验证，包括全血稳
        致流动相的pH发生改变所致；而用碳酸氢铵作为pH调                           定性、分析批长度等，而迄今已报道的 PPD 浓度测定方
        节剂时，因为其是缓冲盐，在室温条件下基本不会挥发，                           法均没有全血稳定性考察。本研究建立的方法已成功
        使得流动相的 pH 相对稳定，所以本方法最终选择 5                          用于人参皂苷 CK 片的临床ⅠB 期研究，且在临床试验
        mmol/L 碳酸氢铵溶液作为水相。碳酸氢铵于湿度                           样品检测过程中还开展了试验样品再分析（ISR）检测，
        25％～75％的室温下保存，使用期限为2 d。                             ISR为100％。
        3.2  前处理方法的选择                                           综上所述，本研究成功建立了人血浆中PPD浓度的
            在方法建立阶段，本课题组参考文献[7－12]采用液                       测定方法，且方法灵敏、准确、稳定，操作简便，血浆用量
        液萃取法进行样品前处理，但发现该方法提取回收率不                            少，可用于人参皂苷 CK 等二醇型人参皂苷的临床药动
        高、处理步骤繁琐，而且血浆用量较大。由于本研究涉                            学研究。
        及临床Ⅰ期试验，临床样品量较大且后期试验周期较                             参考文献
        长，故有必要探索蛋白沉淀法作为样品前处理的可行                             [ 1 ]  韩铭鑫，李方彤，张琰，等.稀有原人参二醇型皂苷的人肠
        性。结合液相条件优化、内标选择，本课题组发现，采用                                道菌群生物转化[J].高等学校化学学报，2019，40（7）：
                                                                 1390-1396.
        乙腈沉淀可以满足本研究大样本检测的要求，同时具有
                                                            [ 2 ]  PENG B，HE R，XU Q，et al. Ginsenoside 20（S）-proto-
        处理过程简单、效率高、血浆用量少的优点，且回收率明
                                                                 panaxadiol inhibits triple-negative breast cancer metasta-
        显高于液液萃取法且更稳定 ，故最终采用该法进行样
                                 [19]
                                                                 sis in vivo by targeting EGFR-mediated MAPK path-
        品前处理。
                                                                 way[J]. Pharmacol Res，2019，142：1-13.
        3.3 基质效应的改善                                         [ 3 ]  ZHANG Y L，ZHANG R，XU H L，et al. 20（S）-proto-
                                            [19]
            蛋白沉淀法的缺点是基质效应明显 。为了尽可                                panaxadiol triggers mitochondrial-mediated apoptosis in
        能消除基质的影响，本研究首先采用梯度洗脱方式，通                                 human lung adenocarcinoma A549 cells via inhibiting the
        过优化水相和有机相的比例、调整两者比例变化的快                                  PI3K/Akt signaling pathway[J]. Am J Chin Med，2013，41
        慢，尽可能地将 PPD 与基质中的干扰物分离，从而减小                             （5）：1137-1152.


        ·2252 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18                                 中国药房    2021年第32卷第18期
   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87