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黄芪注射液是由黄芪药材经水提醇沉法制备而成，                          积的70％乙醇洗脱；收集70％乙醇洗脱液，减压浓缩，即
        收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂（第 17 册）》                         得黄芪注射液中次生成分（得率为10.0％）。临用时，将
        （WS3-B-3335-98），具有益气养元、扶正祛邪、养心通脉、                   该次生成分以无菌注射用水稀释至20 mL（与原黄芪注
        健脾利湿等功效 。黄芪注射液中的化学成分主要包括                            射液中次生成分的浓度一致），备用。
                       [1]
        初生成分和次生成分：初生成分为通过初级代谢活动所                            2.2 黄芪注射液中次生成分的药效作用研究
        产生的植物体自身生长、发育、繁殖等所必需的物质，如                           2.2.1  分组、造模与给药        将小鼠分为正常组、模型组、
        糖类、氨基酸类、有机酸类、核苷类成分等；次生成分是                           黄芪注射液组（0.004 mL/g，剂量根据本课题组前期研究
        植物次生代谢所产生的一类植物体细胞生命活动和生                             结果设置     [19 － 20] ）和次生成分低、中、高剂量组（0.004、
        长发育非必需的少量小分子有机化合物，如生物碱类、                            0.008、0.016 mL/g，剂量根据预实验结果设置），每组 7
        皂苷类、黄酮类、萜类成分等            [2－11] 。临床研究报道，黄芪          只。除正常组小鼠腹腔注射等体积无菌注射用水外，其
        注射液具有升高患者体内白细胞的作用                  [12－17] ，但具体是    余各组小鼠均腹腔注射环磷酰胺（80 mg/kg），连续 3 d。
        黄芪注射液中哪类成分发挥的升高白细胞的作用尚不                             当 模 型 组 和 各 给 药 组 小 鼠 的 血 常 规 指 标 [ 白 细 胞
        明确。基于此，本课题组采用大孔树脂吸附法，分离黄                           （WBC）、中性粒细胞（NE）、淋巴细胞（LY）、单核细胞
        芪注射液中的次生成分，并采用分析速度快、灵敏度高、                          （MO）计数]与正常组小鼠上述指标相比差异有统计学
                                                                                                  [21]
        分辨率高的超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分                           意义时，则表明白细胞减少症模型复制成功 。造模成
                                               [18]
        辨质谱法（UPLC-Q Exactive Orbitrap-HRMS） ，研究黄            功后，各给药组小鼠腹腔注射相应药物，正常组和模型
                                                            组小鼠腹腔注射等体积无菌注射用水，每天1次，连续7
        芪注射液中次生成分作用于白细胞减少症模型小鼠的
                                                            d。实验过程中，每隔 2 d 称定小鼠体质量，并根据小鼠
        代谢组学，以期为寻找黄芪注射液中具有升高白细胞作
                                                            体质量调整给药剂量。
        用的化学成分奠定基础。
                                                            2.2.2  小鼠体质量变化考察           对“2.2.1”项下测得的各
        1 材料
                                                            组小鼠体质量，采用 SPSS 21.0 软件进行统计分析。数
        1.1  主要仪器与软件
                                                            据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两
            本研究所用主要仪器和软件有：Q Exactive Orbitrap
                                                            比较采用 LSD-t 检验，检验水准α＝0.05。结果显示，造
        型高分辨液质联用仪（美国Thermo Scientific Q Exactive
                                                            模前各组小鼠体质量差异无统计学意义（P＞0.05）；给
        公司），KDC-149HR 型离心机（安徽中科中佳科学仪器
                                                            药后第4、8天，模型组小鼠体质量均较正常组显著降低
        有限公司），HEMAVET 950FS 型动物血液分析仪（美国
                                                           （P＜0.05），黄芪注射液组和次生成分低剂量组小鼠体
        Drew Scientific 公司），Xcalibur 3.2 软件、Compound Dis-
                                                            质量均较模型组显著升高（P＜0.05），详见表1。
        coverer 3.0 软件（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），
                                                                  表1   各组小鼠体质量变化（x±±s，n＝7，g）
        Simca-P 13.0软件（瑞典Umetrics公司）。
                                                            Tab 1  Changes of body weight of mice in each group
        1.2  主要药品与试剂
                                                                  （x±±s，n＝7，g）
            本研究所用主要药品与试剂有：黄芪注射液（正大
                                                                                            给药后
        青春宝药业有限公司，批号1807163，规格10 mL/支），注                     分组           造模前      第1天       第4天      第8天
        射用环磷酰胺（德国 Baxter Oncology GmbH 公司，批号                 正常组         24.25±1.87  25.19±2.15  27.65±2.71  29.74±2.16
                                                             模型组         24.00±3.21  24.73±3.31  24.47±1.99 ＊  27.59±1.54 ＊
        8J270A，规格 0.2 g），D101大孔吸附树脂（成都市科隆化
                                                             黄芪注射液组      25.02±3.37  25.16±3.24  26.44±3.28 #  28.75±2.60 #
        学品有限公司，批号 20190613），柠檬酸合成酶试剂盒                        次生成分低剂量组    24.04±1.35  25.35±1.28  26.24±2.21 #  28.64±1.21 #
        （北京索莱宝科技有限公司，批号 BC1060）；乙腈、甲醇                        次生成分中剂量组    24.22±2.04  24.85±2.48  24.96±1.32  27.64±1.43
                                                             次生成分高剂量组    24.54±1.96  25.00±1.35  24.55±2.34  27.90±1.81
        均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离子水。
                                                                                             #
                                                                            ＊
                                                               注：与正常组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
        1.3 动物
                                                                               ＊
                                                               Note：vs. normal group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
                                                                                                 #
            本研究所用动物为SPF级昆明种小鼠，体质量18～                        2.2.3  样本采集     末次给药后，各小鼠均禁食禁水，次
        22 g，购自山西医科大学实验动物中心，动物生产许可证                         日进行眼眶取血，置于含抗凝剂乙二胺四乙酸二钾
        号为 SCXK（晋）2019-0001。所有小鼠均自由摄食、饮                    （EDTA-K2 ）的EP 管中，以全血进行血常规指标检测；同
        水，适应性喂养1周后进行实验。                                     法取血，不抗凝，于 4 ℃条件下以 3 500 r/min 离心 15
        2 方法与结果                                             min，取上层血清于－80 ℃条件下保存，用于 UPLC-Q
        2.1  黄芪注射液中次生成分的制备                                  Exactive Orbitrap-HRMS代谢组学分析。
            取黄芪注射液20 mL，加入预处理过的D101大孔吸                      2.2.4  小鼠血常规指标检测           取“2.2.3”项下经抗凝处
        附树脂柱中，以30倍柱体积的水洗脱后，再以10倍柱体                          理后的各组小鼠全血样品，采用动物血液分析仪检测血


        ·2092 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 17                                 中国药房    2021年第32卷第17期
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