Page 52 - 2021年17期

物 。通过查询 HMDB（http：//www.hmdb.ca/）、MET- 0.8 7
[19]
## #
LIN（http：//enigma.lbl.gov/metlin/）、KEGG（https：//www. 0.6 6 ＊＊
kegg.jp/kegg/pathway.html）等数据库，指认两组间的差 相对含量 0.4 ＊＊ 相对含量 5
异代谢物。结果显示，共指认出21个差异代谢物，分别 0.2 4
为脯氨酰胺、L-脯氨酸、甜菜碱、柠檬酸、L-异亮氨酸、乙 0 3
正常组 模型组 次生成分 正常组 模型组 次生成分
低剂量组 低剂量组
酰肉碱、1-磷酸鞘氨醇、烟酰胺、L-苯丙氨酸、1-硬脂酰
A.亚精胺 B.尿酸
基-sn-甘油-3-磷酸乙醇、D-鞘氨醇、1-十七烷酰基-sn-甘 2.5 2.5 ＊＊
＊＊
油-3-磷酸胆碱、溶血磷脂酰肌醇、亚精胺、邻苯二甲酸 2.0 2.0
酐、二十碳五烯酸、亚油酸、葡萄糖、邻苯二甲酸二丁酯、 相对含量 1.5 ## 相对含量 1.5 ##
尿酸、芥酰胺。 1.0 1.0
0.5
0.5
基于上述方法，将正常组、模型组、黄芪注射液组和 0 0
正常组 模型组 次生成分 正常组 模型组 次生成分
次生成分低剂量组的血清代谢物原始质谱数据进行多 低剂量组 低剂量组
C.柠檬酸 D.烟酰胺
元统计分析，得到 OPLS-DA 得分图（图 2）。由图 2 可
30 ＊＊ 1.0 ＊＊
知，QC 样本数据聚在一起，说明本研究采用的 UPLC-Q ##
0.8
Exactive Orbitrap-HRMS 法用于代谢组学分析具有良好 相对含量 20 ## 相对含量 0.6
的稳定性和可靠性。黄芪注射液组数据比次生成分低剂 10 0.4
0.2
量组数据距离正常组更近，说明黄芪注射液升高白细胞
0 0
的作用强于其次生成分。进一步分析发现，与模型组比 正常组 模型组 次生成分 正常组 模型组 次生成分
低剂量组
低剂量组
较，次生成分低剂量组小鼠血清中亚精胺、尿酸、芥酰胺的 E.二十碳五烯酸 F.亚油酸
相对含量均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），柠檬酸、烟酰 20 10 ＊＊
15 ## 8
胺、二十碳五烯酸、亚油酸、1-磷酸鞘氨醇的相对含量均显 ＊＊ 6 ##
著降低（P＜0.01），表明黄芪注射液中次生成分可明显回 相对含量 10 相对含量 4
调小鼠血清中上述8个差异代谢物的相对含量，详见图3。 5 2
0 0
正常组 模型组 次生成分 正常组 模型组 次生成分
低剂量组 低剂量组
G.芥酰胺 H. 1-磷酸鞘氨醇
正常组
##
#
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
＊＊
黄芪注射液组
#
＊ ＊
次生成分低剂量组 Note：vs. normal group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05，
模型组 ## P＜0.01
QC样本 图3 小鼠血清中8个差异代谢物的相对含量
Fig 3 Relative contents of 8 differential metabolites in
serum of mice
1.006 7*t[2] 组、次生成分低剂量组小鼠心肌组织中柠檬酸合酶的活
性，以验证黄芪注射液中次生成分对三羧酸循环途径的
1.005 95*t[1]
影响。具体方法如下：取血完成后，将各组小鼠处死，取
其心肌组织适量，加 10 倍量（mL/g）生理盐水进行匀浆
图2 各组小鼠血清样本的OPLS-DA得分图 处理，于 4 ℃条件下以 3 000 r/min 离心 10 min；取上清
Fig 2 OPLS-DA score plot of serum samples of mice 液，按相应试剂盒说明书方法操作，检测柠檬酸合酶的
in each group 活性。结果，与正常组[（59.11±0.75）mmol/（min·mg）]
2.3.5 代谢通路分析 将小鼠血清中可被黄芪注射液 比较，模型组小鼠心肌组织中柠檬酸合酶活性[（49.51±
中次生成分回调的8个差异代谢物名称导入MetPA数据 0.94）mmol/（min·mg）]显著降低（P＜0.01）；与模型组比
库（http：//www. Metaboanalyst.ca）进行分析。结果显示， 较，次生成分低剂量组小鼠心肌组织中柠檬酸合酶活
黄芪注射液中次生成分治疗白细胞减少症可能与亚油 性[（57.68±0.60）mmol/（min·mg）]显著升高（P＜0.01）。
酸代谢途径、烟酸和烟酰胺代谢途径、三羧酸循环途径 3 讨论
有关，详见图4。 3.1 黄芪注射液中次生成分对白细胞减少症模型小鼠
2.3.6 柠檬酸合酶的检测 柠檬酸合酶是三羧酸循环 体质量和白细胞的影响
中的关键酶 ，基于此，本研究通过测定正常组、模型 动物体质量的稳定增长，可从侧面反映药物的疗
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·2094 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 17 中国药房 2021年第32卷第17期