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[16]
            非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种以外周脂肪                       接诱导脂肪酸的β-氧化，进而降低肝脏中TG水平 。目
        分解增加、游离脂肪酸摄取增多、线粒体β-氧化减少和                          前，桑根酮 C 是否可通过 PPARα信号通路发挥治疗
                                          [1]
        脂质在肝脏蓄积为主要特征的肝脏病变 。多项研究表                           NAFLD的作用，尚不明确。
        明，NAFLD 与胰岛素抵抗、肥胖、高脂血症、2 型糖尿病                          基于此，本课题组选择常用于研究 NAFLD 的人肝
        和血脂异常等代谢性疾病等相关               [2－3] ，是诸多疾病的主        癌 HepG2 细胞 ，并以游离脂肪酸诱导其发生脂质蓄
                                                                        [17]
        要诱因。在我国，成年人的 NAFLD 患病率高达 15％～                      积，进而探讨桑根酮 C 调节脂质代谢的作用及可能机
        30％，已取代乙型病毒性肝炎成为第一大慢性肝病 。                          制，以期为桑根酮C治疗NAFLD提供实验依据。
                                                     [4]
        目前，治疗NAFLD的药物主要包括抗氧化剂、他汀类药                         1 材料
        物、调脂类药物等 ，但他汀类药物会导致肌肉毒性、肝                          1.1 主要仪器
                       [5]
                               [6]
        毒性和糖尿病等不良反应 。现代研究表明，中药治疗                               本研究所用主要仪器有 MEGAFMGE2.0R 型低温
        NAFLD的疗效较好、毒副作用小，且中药中所含的黄酮                         高速离心机（德国 Hermle 公司），TissueLyser LT 型中低
        类、苷类和生物碱类等成分可通过抗氧化、抗炎、抗纤维                          通量组织研磨器（德国 Qiagen 公司），VCX750 型超声
        化 、改 善 肝 脏 脂 肪 变 性 等 多 种 途 径 来 预 防 和 治 疗           波细胞破碎仪（美国 SONICS 公司），164-5056 型蛋白电
        NAFLD 。                                            泳仪及转膜仪、SmartSpec       TM  Plus 型核酸蛋白测定仪、
              [7]
            桑白皮是桑科植物桑Marus alba L.的干燥根皮，具                  CFX96 型实时荧光聚合酶链式反应（PCR）扩增仪
                                                                 TM
        有抗炎、抗癌、抗肿瘤、抗病毒、降血压、降血糖、降血脂、
                                                           （美国 Bio-Rad 公司），BX53 型荧光倒置显微镜（日本
        镇咳平喘和利尿等作用           [8－9] ，是治疗前列腺癌、高血压、
                                                           Olympus公司），RT-2100C型酶标仪（美国Thermo Fisher
        高血脂和糖尿病等疾病的常用中药               [10－11] 。其中，桑根酮      Scientific公司），Tanon 2500R型全自动化学发光成像仪
        C（Sanggenone C）是桑白皮中的黄酮类有效成分之一，
                                                           （上海天能生命科学有限公司）。
        其化学结构明确（见图 1），是桑白皮药材的质量控制指
                                                           1.2  主要药品与试剂
          [12]
        标 。
                                                               本研究所用主要药品与试剂有桑根酮C（成都克洛
                                                           玛生物科技有限公司，批号 CHB190106，纯度 98％），非
                                                           诺贝特（美国APExBIO公司，批号B1943，纯度98％），油
                                                           酸、棕榈酸（上海源叶生物科技有限公司，批号分别为
                                                           S30037、S30008），牛血清白蛋白（BSA，广州威佳科技有
                   图1   桑根酮C的化学结构式                         限公司，批号 0219989625），油红 O 染色试剂盒、MTT 试
         Fig 1  Chemical structural formula of sanggenone C  剂（北京索莱宝科技有限公司，批号分别为 G1262、
            过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）信号通路                      M8180），DMEM 培养基、胎牛血清（美国 Gibco 公司，批
        在 NAFLD 的发病过程中具有重要的调节作用，能有效                        号分别为1972985、1803122），TG试剂盒（南京建成生物
        控制脂肪酸转运与氧化、脂质合成和分解等代谢过程，                           科技有限公司，批号 A110-1-1），TRIzon 总 RNA 提取试

        维持机体脂质代谢平衡 。PPARα表达上调会促进肉碱                         剂、BCA 蛋白定量试剂盒、RIPA 裂解液（北京康为世纪
                            [13]
        棕榈酰转移酶1（CPT-1）、过氧化物酶体增殖物激活受体                       生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 CW0580、10243、
                                                                                        ®
        γ辅助激活物1α（PGC-1α）等的表达；其中，CPT-1位于线                   CW2333S），逆转录试剂盒、SYBR Green Premix实时荧
        粒体外膜上，是长链脂肪酸氧化的关键调节酶和限速                            光定量扩增试剂盒（艾科瑞生物有限公司，批号分别为
        酶，其水平降低会直接加剧细胞内脂质堆积；PGC-1α能                        AG11701、AG11711），兔源 PPARα单克隆抗体、兔源
        与 PPARα协同作用，促进线粒体脂肪酸氧化、增加机体                        CPT-1 单克隆抗体、兔源 SREBP-1c 单克隆抗体、兔源
        能量消耗，最终达到降脂的效果 。此外，在脂质合成                           FAS 单克隆抗体、兔源 SIRT1 单克隆抗体、兔源 PGC-1α
                                    [14]
        过程中，PPARα还能促进成脂甾醇元件结合蛋白固醇调                         单克隆抗体、兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克
        节元件结合蛋白 1c（SREBP-1c）的转录过程，从而抑制                     隆抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球
        脂肪酸合成基因脂肪酸合成酶（FAS）的表达，进而抑制                         蛋白 G（IgG）二抗（美国 Affinity Biosciences 公司，批号
        肝脏中三酰甘油（TG）和脂肪酸的合成 。沉默信息调                          分 别 为 AF5301、DF12004、AF6283、AF5342、DF6033、
                                         [15]
        节因子 1（SIRT1）在 NAFLD 的脂质代谢过程中发挥着                    AF5395、AF7021、S0001），ECL 化 学 发 光 试 剂（美 国
        至关重要的作用，其可激活PGC-1α的去乙酰化，从而间                        Millipore 公司，批号 1808501）；PCR 引物由生工生物工


        中国药房    2021年第32卷第15期                                             China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15  ·1869 ·
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