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12 批金钗石斛(S1~S12)醇提物组(100 μg/mL,给药质 2.3 谱效关系分析
量浓度根据本课题组前期预实验结果设置),每组设 3 2.3.1 抗炎指标的数据转化 将“2.2.2”项下RAW264.7
个复孔。正常对照组加入培养基200 μL,模型组细胞加 巨噬细胞培养液中 IL-4、IL-6 含量按以下公式进行数据
入含 100 ng/mL 脂多糖的培养基 200 μL,各给药组加入 转化:IL-4抑制率=[1-(给药组IL-4含量-正常对照组
含 100 ng/mL 脂多糖和相应药物的培养基 200 μL;细胞 IL-4含量)/(模型组IL-4含量-正常对照组IL-4含量)]×
培养 24 h 后,收集培养液,以 3 000 r/min 离心 5 min,取 100%;IL-6 抑制率=[1-(给药组 IL-6 含量-正常对照
上清液,按照相应 ELISA 试剂盒说明书方法操作;采用 组 IL-6 含量)/(模型组 IL-6 含量-正常对照组 IL-6 含
酶标仪于 450 nm 波长下测定吸光度,计算上清液中 量)]×100%。抗炎指标的数据转化结果见表4。
IL-4、IL-6 含量。采用 SPSS 24.0 软件对数据进行统计 表4 抗炎指标的数据转化结果(%%)
分析,数据结果以 x±s 表示。组间比较采用单因素方 Tab 4 Data transformation results of anti-inflamma-
差分析,方差齐时,采用 LSD 检验;方差不齐时,采用 tory indexes(%%)
Dunnett’s T3检验。检验水准α=0.05。 组别 IL-4抑制率 IL-6抑制率
金钗石斛S1醇提物组 49.61 45.23
结果,与正常对照组比较,模型组细胞培养液中
金钗石斛S2醇提物组 41.28 42.47
IL-4、IL-6含量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,地 金钗石斛S3醇提物组 39.29 56.42
塞米松组细胞培养液中IL-4、IL-6含量均显著降低(P< 金钗石斛S4醇提物组 41.24 38.14
金钗石斛S5醇提物组 16.95 27.59
0.01),金钗石斛S1~S12醇提物组细胞培养液中IL-4含
金钗石斛S6醇提物组 16.51 34.63
量均显著降低(P<0.05 或 P<0.01),金钗石斛 S1~S8、 金钗石斛S7醇提物组 17.75 36.78
S10 醇提物组细胞培养液中 IL-6 含量均显著降低(P< 金钗石斛S8醇提物组 22.86 35.98
金钗石斛S9醇提物组 13.21 4.91
0.05 或 P<0.01),表明 12 批金钗石斛醇提物对细胞中 金钗石斛S10醇提物组 15.56 10.37
IL-4、IL-6含量均具有不同程度的抑制作用;且贵州省赤 金钗石斛S11醇提物组 16.80 10.75
金钗石斛S12醇提物组 9.78 2.62
水市产金钗石斛(S1~S4)醇提物的抑制作用较强,云南
2.3.2 数据处理 采用均值法将“2.3.1”项下 12 批金钗
省昭通市镇雄县产金钗石斛(S5~S8)醇提物次之,四川
石斛醇提物的抗炎活性指标的转化数据与其共有峰峰
省乐山市夹江县产金钗石斛(S9~S12)醇提物则相对较
面积数据进行归一化处理 [18-19] 。将归一化后的抗炎活
弱,详见表3。
性指标设置为母序列 Y (k) ,18 个共有峰归一化后峰面积
表3 12批不同产地金钗石斛醇提物对RAW264.7巨噬
设置为子序列为 Xi (i 表示共有峰编号 1、2、3……18),
细胞培养液中IL-4、IL-6含量的影响(x±±s,n=3)
然后计算母序列与子序列的灰色关联系数 Ai(k):Ai(k)=
Tab 3 Effects of ethanol extracts from 12 batches of
[Δi (k)min+ρ×Δi (k)max]/[Δi (k) +ρ×Δi (k)max],其中Δi (k) =|Y (k) -Xi |,
D. nobile from different habitats on the con-
分辨系数ρ为0.5。
tents of IL-4 and IL-6 in RAW264.7 cells(x±±s,
2.3.3 灰色关联度分析 根据“2.3.2”项下得到的数据,
n=3)
采用灰色关联度分析法计算母序列与子序列的灰色关
组别 IL-4,pg/mL IL-6,pg/mL
正常对照组 188.16±8.38 16.47±2.73 联系数 Ai(k) 的平均值,即关联度。当关联度大于 0.8,则
模型组 703.86±6.29 ** 123.00±1.49 ** 表示母序列与子序列关联度较大;当关联度介于 0.6~
地塞米松组 438.54±8.42 ## 39.59±0.45 ## 0.8 之间,则表示两者关联度一般;当关联度小于 0.6,则
金钗石斛S1醇提物组 448.03±11.41 ## 74.85±0.79 ##
[19]
金钗石斛S2醇提物组 490.96±14.57 ## 77.80±1.91 ## 表示两者关联度较小 。结果显示,12批金钗石斛醇提物
金钗石斛S3醇提物组 491.20±30.91 ## 82.42±2.18 ## 的18个共有峰与IL-4含量的关联度为0.503 4~0.815 8,
金钗石斛S4醇提物组 501.25±11.84 ## 62.93±7.52 ## 除4、18号峰外,其余共有峰与IL-4含量的关联度均大于
金钗石斛S5醇提物组 616.44±10.75 # 93.66±0.75 #
金钗石斛S6醇提物组 618.74±9.37 # 86.15±1.41 ## 0.6,且5、7号峰与IL-4含量的关联度均大于0.8;12批金
金钗石斛S7醇提物组 627.79±2.69 # 83.87±2.70 ## 钗石斛醇提物的 18 个共有峰与 IL-6 含量的关联度为
金钗石斛S8醇提物组 585.96±9.92 ## 84.71±6.61 ## 0.554 0~0.844 0,除9、14、4、3、18号峰外,其余共有峰与
金钗石斛S9醇提物组 635.75±7.81 # 117.83±1.48
金钗石斛S10醇提物组 623.63±8.37 # 112.02±1.28 # IL-6含量的关联度均大于0.6,且1、12、13号峰与IL-6含
金钗石斛S11醇提物组 617.22±25.70 ## 117.34±2.21 量的关联度均大于0.8,详见表5、表6。
金钗石斛S12醇提物组 653.44±5.07 # 120.28±1.33
3 讨论
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##
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注:与正常对照组比较, P<0.01;与模型组比较,P<0.05,P<
本研究基于 12 批金钗石斛醇提物 HPLC 指纹图谱
0.01
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Note:vs. normal group, P<0.01;vs. model group,P<0.05, 与其抗炎作用的谱效关系,初步揭示了不同产地金钗石
* *
P<0.01
## 斛内在质量的差异以及潜在的抗炎作用成分。由指纹
·1828 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15 中国药房 2021年第32卷第15期