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石斛为兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl、             25200-056），胎 牛 血 清（美 国 ScienCell 公 司 ，批 号
        鼓槌石斛 D. chrysotoxum Lindl 或流苏石斛 D. fimbria-         19797），脂多糖（美国 Sigma 公司，批号 L2630），IL-4 酶
        tum Hook 的栽培品及其同属植物近似种的新鲜或干燥                        联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（深圳欣博盛生物科技有
        茎，其性甘、微寒，具有益胃生津、滋阴清热的功效 。现                          限公司，批号M190521-003a），IL-6 ELISA试剂盒（武汉
                                                   [1]
        代药理研究表明，石斛具有抗炎、增强免疫力、降血糖、                           伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号JUUIH4ECKG）；
                                                   [2]
        抗衰老、抗肿瘤和保护神经系统等多种药理活性 。相                            甲醇为色谱纯，甲酸为分析纯，水为超纯水。不同产地
                                                      [3]
        关研究结果显示，金钗石斛被较好地应用于慢性咽炎 ，                           金钗石斛药材来源信息见表1。
        对炎症因子的分泌和炎症反应的发生具有良好的抑制                                    表1 不同产地金钗石斛药材来源信息
        作用   [4－5] 。然而，不同产地的金钗石斛因其生长的土壤                     Tab 1 Source information of D. nobile from different
                                   [6]
        环境的异质性和微生态差异性 ，可能在内在性状、化学                                  habitats
        成分、药理活性等方面表现出一定的差异 ，而这些方面                            编号      产地              编号         产地
                                            [7]
                                                             S1      贵州省赤水市          S7         云南省昭通市镇雄县
        的差异在一定程度上影响着金钗石斛的临床药效。因
                                                             S2      贵州省赤水市          S8         云南省昭通市镇雄县
        此，对不同产地金钗石斛的内在质量进行考察是必要                              S3      贵州省赤水市          S9         四川省乐山市夹江县
        的，可为其质量控制以及临床用药提供一定的参考。                              S4      贵州省赤水市          S10        四川省乐山市夹江县
                                                             S5      云南省昭通市镇雄县       S11        四川省乐山市夹江县
            目前，相关研究以中药化学成分谱和中药药效活性
                                                             S6      云南省昭通市镇雄县       S12        四川省乐山市夹江县
        为切入点进行中药谱效关系的研究，可以更加全面地对
                                                            1.3 细胞
        中药质量进行评价，并为其药效物质基础研究提供新思
                                                                本研究所用小鼠源性RAW264.7巨噬细胞株购自美
        路 [8－9] 。已有研究采用谱效关系研究来考察不同产地中
                                                            国ATCC公司。
        药材的内在质量差异，并筛选出潜在的药效成分                      [10－12] ，
                                                            2 方法与结果
        因此，本研究参考文献[13－14]方法将12批不同产地金
                                                            2.1  金钗石斛醇提物HPLC指纹图谱的建立
        钗石斛以乙醇煎煮回流提取制备醇提物，并建立该醇提
                                                            2.1.1  金钗石斛醇提物的制备            将 12 批金钗石斛药材
        物的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱；以白细胞介素 4
                                                            以打粉机制成粗粉。精密称取各批药材粗粉各25 g，分
        （IL-4）、IL-6 为炎症指标 ，结合灰色关联度分析法 ，
                              [15]
                                                     [16]
                                                            别置于圆底烧瓶中，加入 90％乙醇 625 mL 后，置于
        初步探讨金钗石斛抗炎作用的药效基础，为该药材的内
                                                            60 ℃水浴锅内回流提取2次，每次1 h；过滤，合并2次的
        在质量评价提供理论依据。
                                                            滤液，使用旋转蒸发仪将滤液浓缩至20 mL；将浓缩后溶
        1 材料                                                液转入烧杯中，继续置于60 ℃水浴锅中充分挥干乙醇，
        1.1  主要仪器                                           即得金钗石斛醇提物浸膏。将该浸膏置于－80 ℃条件
            本研究所用主要仪器有：e2695/2998型HPLC仪（美                   下冷冻过夜，然后置于冷冻干燥机中冻干，即得金钗石
        国Waters公司），BSA323S型电子精密天平（北京赛多利                     斛醇提物粉末（以生药量计，得率为6.11％）
        斯科学仪器有限公司），Milli-Q Advantage A10型超纯水                2.1.2  色谱条件      色谱柱为 Sapphire C18 （250 mm×4.6
        机（美国 Millipore 公司），SB-1200 型数显恒温水浴锅、                mm，5 μm）；流动相为0.1％甲酸（B）-甲醇（D），梯度洗脱
        N-1200B 型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司），                        （0～10 min，5％D→10％D；10～20 min，10％D→20％D；
        FD-1C-80型冷冻干燥机（上海比朗仪器制造有限公司），                       20～28 min，20％D→30％D；28～55 min，30％D→60％D；
        109922-7730型CO2培养箱（美国Thermo Fisher Scientific       55～65 min，60％D→65％D；65～75 min，65％D→90％D；
        公司），5810F 型台式离心机（德国 Eppendorf 公司），                  75～80 min，90％D→10％D）；流速为 1.0 mL/min；柱温
        TUNE型多功能酶标仪（美国Molecular Devices公司）。                 为25 ℃；检测波长为254 nm；进样体积为20 μL。
        1.2 主要药品与试剂                                         2.1.3  供试品溶液的制备          分别称取“2.1.1”项下制备
            本研究所用 12 批金钗石斛药材（编号 S1～S12）分                    的 12 批金钗石斛醇提物粉末 25 mg，置于烧杯中，以适
        别购自四川省乐山市夹江县、贵州省赤水市、云南省昭                            量甲醇溶解后，转入 25 mL 量瓶，以甲醇定容；分别取 1
        通市镇雄县，经深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院中药新药研                            mL 上述溶液经 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取滤液，即得供
        究室李一圣副主任中药师鉴定为兰科植物金钗石斛 D.                           试品溶液。
        nobile Lindl的干燥茎。其他药品与试剂有：石斛酚对照                     2.1.4  对照品溶液的制备           精密称取石斛酚对照品
        品、地塞米松对照品（中国食品药品检定研究院，批号分                           250 μg，置于烧杯中，以适量甲醇溶解后，转入 25 mL 量
        别 为 111875-201202、100129-201506，纯 度 均 不 低 于         瓶，以甲醇定容；取 1 mL 上述溶液经 0.22 μm 微孔滤膜
        99％），DMEM 细胞培养基（美国 HyClone 公司，批号                    滤过，取滤液，即得对照品溶液。
        AE25719279），0.25％胰酶-EDTA（美国Gibco公司，批号               2.1.5  精密度试验       取“2.1.3”项下制备的供试品溶液


        ·1826 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15                                 中国药房    2021年第32卷第15期
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