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supernatant. Cell apoptosis was detected by acridine orange/ethidium bromide（AO/EB）staining. Western blot assay was used to
detect the expression of apoptosis related proteins（cleaved caspase-3，Bcl-2，Bax）and the phosphorylation level of nuclear factor κB
（NF-κB）/NF-κB suppressor protein α（IκBα）signaling pathway related proteins（NF-κB p65，IκBα）. RESULTS：Compared with
the normal group，survival rate，the activity of GSH-Px and protein expression of Bcl-2 in high glucose groups were decreased
significantly（P＜0.01）；the activities of ROS and LDH，the levels of TNF-α and IL-6，the protein expression of Bax and cleaved
caspase-3，and the phosphorylation level of NF-κB p65 and IκBα were increased significantly（P＜0.01）；the cells showed orange
yellow fluorescence，and the number of cells with fuzzy morphology increased significantly，showing an obvious apoptotic state.
There was no statistical significance in above indexes of osmotic pressure control group compared with normal group. Compared
with high glucose group，the activities or levels of above indexes （except for cell survival rate an LDH activity in low
concentration group）were reversed significantly in DMDD groups（P＜0.05 or P＜0.01）；the orange yellow fluorescence in the
cells decreased significantly，and the cell morphology was relatively complete. CONCLUSIONS：DMDD can significantly improve
H9c2 myocardial cell injury induced by high glucose；the mechanism of which may be associated with suppressing oxidative stress
and inflammatory response，regulating the expression of apoptosis related protein and NF-κB/IκBα pathway related protein.
KEYWORDS 2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2，5-diene-1，4-dione；Diabetic cardiomyopathy；H9c2 myocardial cell；Apoptosis；
NF-κB/IκBα signaling pathway

糖尿病心肌病是一种糖尿病心血管并发症，由机体 1 材料
糖代谢紊乱引发，可表现出心肌组织结构异常和心功能 1.1 主要仪器
下降，在疾病末期常伴有充血性心力衰竭和心收缩功能 本研究所用主要仪器有 311 型 CO2 细胞培养箱、
不全，是目前糖尿病患者死亡的主要原因 。现有的研 Micro CL17R 型高速冷冻离心机（美国 Thermo Fisher
[1]
究认为，心肌细胞损伤所致的凋亡是糖尿病心肌病产生 Scientific公司），1450型生物超净台（苏州净化设备有限
的关键因素，在整个疾病发生和发展过程中持续存在并 公司），CKX-41 型荧光倒置显微镜（日本 Olympus 公
扮演重要角色 。然而糖尿病心肌病的心肌细胞凋亡发 司），SpectraMaxPlus384型多功能酶标仪（香港分子仪器
[2]
生机制复杂，目前认为其与高糖引起的非酯化脂肪酸累 有限公司），Odysse Clx 型双色红外荧光成像仪（美国
积、活性氧簇（ROS）聚集、炎症反应及自噬紊乱等有 Li-COR 公司），Mini PROTEAN Tetra Cell 型电泳槽（美
®
关 [3－4] 。因此，研发能有效缓解高糖所致心肌细胞损伤 国Bio- Rad公司）。
的药物，对于防治糖尿病心肌病具有十分重要的意义。 1.2 主要药品与试剂
2-十二烷基-6-甲氧基-2，5-二烯-1，4-环己二酮 本研究所用 DMDD 由本实验室自制，纯度不低于
（2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2，5-diene-1，4-dione，简 80％ ；低 糖 DMEM 培 养 基 、胰 蛋 白 酶（批 号 分 别 为
称为“DMDD”）是本课题组首次从酢浆草科植物杨桃根 8120459、2120539）均购自美国 Gibco 公司；青链霉素混
[5]
Averrhoa carambola L.中分离出的一种活性成分 ，具有 合液、磷酸盐缓冲液（PBS）、MTT 试剂（批号分别为
降血糖、改善血脂代谢、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等药理 20190306、20200804、715F0527）均购自北京索莱宝科技
作用 [6－7] 。经本课题组前期预实验发现，DMDD 可明显 有限公司；胎牛血清（批号A58G00J）购自美国Gemini公
改善糖尿病心肌病模型小鼠的心肌损伤，但其具体作用 司；BCA 蛋白浓度检测试剂盒（批号 P0010S）购自上海
机制尚不明确。相关研究发现，NF-κB通路能调控H9c2 碧云天生物技术有限公司；兔抗GAPDH多克隆抗体、兔
心肌细胞的氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等多个生理 抗 cleaved caspase-3 多克隆抗体、兔抗 Bax 多克隆抗体、
或病理过程，进而影响心肌损伤，是治疗糖尿病心肌病 兔抗Bcl-2多克隆抗体、兔抗IκBα多克隆抗体（批号分别
[8]
的潜在靶点 。基于此，本研究以高糖诱导建立H9c2心 为 00083125、00077110、00089105、00093692、00091696）
肌细胞损伤模型，研究DMDD对模型细胞的存活率、氧 均购自美国 Proteintech 公司；兔抗 NF-κB p65 多克隆抗
化应激相关因子[ROS、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、 体（批号CN89330）购自南京巴傲得生物科技有限公司；
乳酸脱氢酶（LDH）]、炎症因子[肿瘤坏死因子α（TNF-α）、 兔抗磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）多克隆抗体、兔抗
白细胞介素6（IL-6）]、凋亡相关蛋白[活化的胱天蛋白酶 磷酸化IκBα（p-IκBα）多克隆抗体、DyLight TM 800荧光标
3（cleaved caspase-3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关 记的山羊抗兔免疫球蛋白二抗（批号分别为 3033S、
X蛋白（Bax）]以及核因子κB（NF-κB）/NF-κB抑制蛋白α 2859S、5151）均购自美国 Cell Signaling Technology 公
（IκBα）信号通路相关蛋白（NF-κB p65、IκBα）的影响，以 司；吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色试剂盒（批号
期为 DMDD 治疗糖尿病心肌病提供理论基础和实验 0629A20）购自北京雷根生物技术有限公司；小鼠 ROS、
依据。 IL-6、TNF-α酶联免疫试验试剂盒（批号分别为Oct2019、

·1806 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15 中国药房 2021年第32卷第15期