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子源温度为 500 ℃；采用多反应监测模式，采集模式为 2 000、600、200、60、20 nmol/L的系列样品溶液。取上述
正离子模式；气帘气压力为20 psi，雾化气压力为50 psi， 系列样品溶液各50 μL，分别加入大鼠、猴和人空白血浆
辅助加热气压力为 60 psi；LGT-6 的去簇电压为 134 V， 950 μL，涡旋混匀。各取上述血浆样品 100 μL，按“2.4”
碰撞电压为 34 V，入口电压为 10 V，碰撞室出口电压为 项下方法处理，再按“2.1”项下条件进样测定，记录峰面
10 V，定量分析用离子对为 m/z 487.0→434.3；内标的去 积。以 LGT-6 的浓度为横坐标（c，nmol/L）、LGT-6 与内
簇电压为70 V，碰撞电压为18 V，入口电压为10 V，碰撞 标峰面积的比值为纵坐标（y），采用加权最小二乘法（加
室出口电压为 10 V，定量分析用离子对为 m/z 271.1→ 权系数为1/c）进行线性回归。结果，LGT-6在大鼠、猴、人
172.0。 血浆中的回归方程分别为y＝1.28c+0.36（R ＝0.998 9）、
2
2.2 溶液的制备 y＝1.09c+0.27（R ＝0.999 1）、y＝1.32c+0.45（R ＝0.998 5），
2
2
精密称取LGT-6对照品和内标对照品各适量，分别 其检测浓度的线性范围均为 1～900 nmol/L，定量下限
置于 10 mL 量瓶中，加入甲醇 0.2 mL 使其溶解，再以 均为1 nmol/L。
PBS 定容，摇匀，制成浓度均为 100 μmol/L 的 LGT-6、内 2.5.3 精密度与准确度试验 按“2.5.2”项下方法制备
标贮备液。
LGT-6定量下限浓度（1 nmol/L）和低、中、高浓度（3、50、
2.3 大鼠血浆的采集
720 nmol/L）的质控样品各 6 份，按“2.4”项下方法处理，
取SD大鼠12只，雌雄各半，于股动脉取血2 mL，置
再按“2.1”项下条件进样测定，记录峰面积，考察日内精
于装有肝素钠溶液的EP管中，于4 ℃下以3 500 r/min离
密度；连续测定5 d，考察日间精密度。以实测浓度与理
心10 min，分离上层血浆，于－80 ℃冷冻贮存，备用。
论浓度的百分比考察准确度。结果，LGT-6定量下限浓
2.4 样品处理
度和低、中、高浓度质控样品在大鼠、猴和人血浆中的日
取透析内液（血浆样品）与透析外液（PBS）各100 μL，
内、日间RSD均小于10％，准确度为90.46％～105.77％，
分别置于 EP 管中，依次加入甲醇 600 μL、内标贮备液
符合生物样品定量分析方法的相关要求 ，详见表1。
[16]
100 μL，涡旋混匀后，于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 10
2.5.4 基质效应试验 取大鼠、猴、人空白血浆各适量，
min，取上清液，于 37 ℃下用氮气流吹干，残渣加水 400
按“2.4”项下方法处理后，加入相应浓度的LGT-6样品溶
μL、乙酸乙酯600 μL复溶，涡旋混匀，静置分层后，取乙
液100 μL，制成LGT-6低、中、高浓度（3、50、720 nmol/L）
酸乙酯层，于 37 ℃下用氮气流吹干，残渣再用甲醇 100
的质控样品各 6 份，按“2.1”项下条件进样测定，记录峰
μL 复溶，于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清
面积（A1 ）。以甲醇为溶剂，配制与前者浓度对应的
液，按“2.1”项下条件进样测定。
LGT-6 对照品溶液各6份，按“2.1”项下条件进样测定，记
2.5 方法学考察
录峰面积（A2 ），按如下公式计算基质效应：基质效应＝A1/
2.5.1 专属性考察 分别取空白透析外液（PBS）和大
A2×100％。结果，LGT-6低、中、高浓度质控样品的基质效
鼠、猴、人空白血浆各适量，以甲醇替代内标，其余按
[16]
应均符合生物样品定量分析方法的相关要求 ，详见表2。
“2.4”项下方法处理，制成空白透析外液样品和大鼠、猴、
2.5.5 稳定性试验 按“2.5.2”项下方法制备LGT-6低、
人的空白血浆样品（下同）。取 LGT-6 对照品和内标对
中、高浓度（3、50、720 nmol/L）的质控样品，分别置于
照品各适量，以甲醇溶解稀释制成 LGT-6 浓度为 10
4 ℃下冷藏 12 h、室温（约 20 ℃）下静置 12 h、反复冻融
mmol/L、内标浓度为 1 mmol/L 的混合对照品溶液。将
（4～37 ℃）3 次后，按“2.4”项下方法处理，再按“2.1”项
LGT-6 浓度为 300 nmol/L 的 PBS 与人、猴和大鼠的空白
血浆平衡 48 h 后，取透析内液按“2.4”项下方法处理，制 下条件进样测定，记录峰面积。每样品平行6份，考察其
成血浆样品。将空白透析外液样品、空白血浆样品、混 稳定性。结果，各质控样品中LGT-6含量的RSD均小于
合对照品溶液、血浆样品按“2.1”项下条件进样测定，记 10％，表明其在上述条件下稳定性良好，详见表3。
录色谱图，结果见图 2（因为人、猴与大鼠的空白血浆样 2.5.6 稀 释 可 靠 性 考 察 按“2.5.2”项 下 方 法 制 备
品、血浆样品色谱图基本一致，所以省略人和猴的血浆 LGT-6 浓度为 3 600 nmol/L 的标准血浆样品，用 PBS 稀
样品色谱图，以大鼠血浆样品的色谱图作为代表）。由 释 5 倍至质控样品浓度（720 nmol/L），每浓度平行 6 份。
图2可见，LGT-6和内标色谱峰的峰形良好，保留时间分 按“2.4”项下方法处理，再按“2.1”项下条件进样测定，记
别约为7.5、8.7 min，血浆中的内源性物质和空白透析外 录峰面积并代入回归方程计算LGT-6浓度，再计算准确
液均不干扰LGT-6的分析测定，表明方法专属性良好。 度和精密度。结果，准确度为103.77％～105.27％，精密
2.5.2 标准曲线绘制 精密量取“2.2”项下 LGT-6 贮备 度 RSD 均小于 10％，表明用 PBS 稀释血浆样品不影响
液，用 PBS 逐级稀释制成浓度分别为 18 000、6 000、 血浆样品的定量准确性，详见表4。
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