Page 71 - 2021年14期

rates of LGT-6 in rat，monkey and human plasma under the same concentration.
KEYWORDS Dipeptidyl peptidase-4 inhibitor； LGT-6； Balanced dialysis； UPLC-MS/MS； Plasma protein binding rate；
Different species of plasma

随着发病率和致死率的逐年上升，糖尿病已成为全
[1]
球最大的公共卫生事件之一 。相比于传统的双胍类、
磺酰脲类、噻唑烷酮类、美脲类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、
胰岛素（易引起体质量增加、胃肠道不适、低血糖风险升
图1 DPP-4抑制剂LGT-6结构式
高等）和新型治疗药物胰高血糖素样肽1受体激动剂（需
Fig 1 Structure of DPP-4 inhibitor LGT-6
皮下注射给药）、钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（存在
公司）、JN300-2 型氮气吹扫仪（苏州吉米诺仪器有限公
潜在的降低血压及引起生殖感染的风险）等，二肽基肽
司）、X1型高速离心机（香港基因有限公司）、FA805N型
酶 4（DPP-4）抑制剂以其独特的降糖机制以及较高的安
十万分之一电子天平（上海菁海仪器有限公司）、HH-2
全性引起了人们越来越多的关注 [2－8] 。经典的 DPP-4 抑
型数显恒温水浴锅（邦西仪器科技有限公司）、HC-100
制剂如沙格列汀、阿格列汀等均为每天给药1次。然而，
型制冷型恒温混匀仪（北京昊诺斯科技有限公司）、
2 型糖尿病是需要终身服药的慢性代谢性疾病，患者对
DW-86L486 型 － 80 ℃ 立 式 超 低 温 保 存 箱 和 BCD-
该病的治疗需求已经逐渐从每天给药1次向每周给药1
248WDPM型－20 ℃冰箱（青岛海尔集团）等。
次转变 [9－10] 。尽管长效抑制剂曲格列汀和奥格列汀已于
1.2 主要药品与试剂
2015 年在日本获批上市 [1－2] ，然而其原研企业均表示不
LGT-6 对照品（批号 20200804）由贵州医科大学高
会再寻求每周给药1次的糖尿病药物在除日本以外的国
等药物化学重点实验室合成，经高效液相色谱和核磁共
家上市 [11－12] 。因此，研发出具有自主知识产权的长效
振结构鉴定纯度＞99.0％；甲苯磺丁脲对照品（内标，批
DPP-4抑制剂对于提高患者用药依从性、降低长期给药
可能带来的严重副反应等具有重要研究意义。 号HY-B0401-46070，纯度＞99.0％）购自美国MedChem-
LGT-6 的化学名为 8-[（3R）-3-氨基-1-哌啶基]-7-（2- Express 公司；透析袋（截留分子量 8～14 kDa）购自北京
丁炔-1-基）-3，7-二氢-3-甲基-1-[1-（4-甲基喹唑啉-2-基） 兰杰柯科技有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）购自
乙基]-1H-嘌呤-2，6-酮（结构式见图1），是本课题组前期 北京索莱宝科技有限公司；甲醇、乙腈、乙酸乙酯和甲酸
以利格列汀为先导化合物，经过化学结构修饰而获得的 均为色谱纯，其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，
DPP-4 抑制剂，其降糖活性、药动学性质均优于利格列 实验用水为蒸馏水。
[13]
汀 。药物的血浆蛋白结合率是指药物入血后与血浆 1.3 实验动物
中所有蛋白结合的量占药物总量的百分比，是反映药物 本研究所用动物为SPF级SD大鼠，雌雄各半，12周
在体内吸收、分布、代谢、排泄过程的重要药动学参数之 龄，体质量为 200～230 g，购自长沙市天勤生物技术有
一。药物被吸收后，只有没有与血浆蛋白结合的游离药 限公司，实验动物生产许可证号为 SCXK（湘）2019-
物才能通过生物膜并作用于靶器官而发挥药理作用，故 0014。
测定药物与血浆蛋白的结合率在新药研发及临床研究 1.4 血浆
中非常重要 [14－15] 。血浆蛋白结合会影响药物在组织和 健康人血浆（货号 PL030320T）由北京四正柏生物
血液中的药动学特征以及后期相关制剂的给药方案；此 科技有限公司提供；猴血浆由美迪西普亚医药科技上海
外，血浆蛋白结合率也是设置人体暴露安全范围和临床 有限公司提供；大鼠血浆取自“1.3”项下SD大鼠。
试验剂量的重要依据。为此，本研究采用平衡透析法结 2 方法与结果
合超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS法）测定 2.1 色谱与质谱条件
LGT-6在不同种属血浆中的蛋白结合率，为该化合物后 以ACQUITY UPLC HSS T3（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）
期的药效学、药理学和临床研究提供依据。 为色谱柱，以水（含 0.01％甲酸）为流动相 A、乙腈（含
1 材料 0.01％甲酸）为流动相B进行梯度洗脱（0～2 min，10％B；
1.1 主要仪器 2～7 min，10％B→95％B；7～9 min，95％B；9～11 min，
本研究所用主要仪器包括LC-30AD型UPLC仪（日 95％B→10％B，11～14 min，10％B）；流速为0.6 mL/min；
本 Shimadzu 公司）、TQ-6500+型质谱检测仪（美国 AB 柱温为40 ℃；自动进样器温度为4 ℃；进样量为2 μL。
Sciex 公司）、Thermo 型恒温培养箱（上海一恒仪器有限 离子源为电喷雾离子源，离子源电压为5 500 V，离

中国药房 2021年第32卷第14期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 ·1729 ·