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也有所延长，但差异均无统计学意义（P＞0.05）；双氯芬 定，记录色谱图。将10批样品的色谱图导入《中药色谱
酸二乙胺乳胶剂组和 10 批不同产地三七姜乙酸乙酯提 指纹图谱相似度评价系统（2012版）》中，以S1样品的色
取物组小鼠 15 min 内扭体次数均显著减少（P＜0.01）。 谱图为参照图谱（因 S1 样品图谱的色谱峰信号相对较
10 批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物组小鼠的镇痛率 强且峰形较好），设置时间窗宽度为 0.1 s，采用多点校正
为45.56％～52.72％，说明各样品均有较好的镇痛作用。 法进行色谱峰匹配生成叠加指纹图谱，并采用中位数法
2.3 10批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物的HPLC指 生成对照指纹图谱（R）。结果，共确定了 18 个共有峰。
纹图谱 10 批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物的 HPLC 叠加指
2.3.1 溶液制备 （1）对照品溶液：称取对羟基苯甲酸、 纹图谱和对照指纹图谱见图1。
原儿茶酸、对羟基苯甲醛对照品各适量，加甲醇溶解制 4 000 10 12 13
成上述成分质量浓度分别为 0.212、0.236、0.149 mg/mL 3 600 2（S） 15 18
3 200 1 3 4 5 6 7 8 9 11 14 16 17
的混合对照品溶液。（2）三七姜供试品溶液：分别称取不 2 800
2 400
mV
同产地三七姜乙酸乙酯提取物0.1 g，精密称定，用5 mL U， 2 000
1 600
甲醇超声（功率 250 W，频率 50 kHz）提取 5 min，用甲醇 1 200
800
定容到 10 mL 量瓶中，混匀，过滤，滤液以 13 000 r/min 400
0
离心 10 min，取上清液，过 0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液 0 10 20 30 40 50 60 70
t，min
作为供试品溶液。 A.叠加指纹图谱
2.3.2 色谱条件 以 Phenomenex Kinetex XB C18 （250
mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以 0.1％磷酸溶液（A）-乙 1 220 12 13
腈（B）为流动相进行洗脱梯度（0～20 min，60％B；20～ 915
10
50 min，60％B→80％B；50～75 min，80％B→100％B）； mV 609
U， 15
流速为 0.8 mL/min；检测波长为 260 nm；柱温为 30 ℃；
303 18
2（S）
进样量为10 μL。 1 3 4 5 6 7 8 9 11 14 16 17
0 R
2.3.3 精密度试验 称取三七姜乙酸乙酯提取物（编号 0 10 20 30 40 50 60 70
t，min
S9）0.1 g，按“2.3.1（2）”项下方法制备供试品溶液，然后 B.对照指纹图谱
按“2.3.2”项下色谱条件连续测定 6 次，记录色谱图。结 图1 10批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物的叠加指纹
果，以2号峰（对羟基苯甲酸，该峰含量相对较高、分离度 图谱和对照指纹图谱
良好且出峰稳定）为参照峰（S），计算得各共有峰相对保 Fig 1 HPLC superimposed fingerprint and control
留时间的RSD均小于0.18％（n＝6）、相对峰面积的RSD fingerprint of ethyl acetate extracts of S. invo-
均小于1.80％（n＝6），表明方法精密度良好。 lucratus from 10 different habitats
2.3.4 稳定性试验 取三七姜乙酸乙酯提取物（编号 2.3.7 共有峰的指认 取“2.3.1（1）”项下混合对照品溶
S9）0.1 g，按“2.3.1（2）”项下方法制备供试品溶液，于室 液适量，按“2.3.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱
温下放置0、2、4、8、16、24 h时分别按“2.3.2”项下色谱条 图。通过比对该混合对照品图谱与对照指纹图谱（图
件进样测定，记录色谱图。结果，以2号峰为参照峰，计 1B）中各成分峰的保留时间，指认出峰1为原儿茶酸、峰
算得各共有色谱峰相对保留时间的 RSD 均小于 0.34％ 2 为对羟基苯甲酸、峰 4 为对羟基苯甲醛。混合对照品
（n＝6）、相对峰面积的 RSD 均小于 2.12％（n＝6），表明 的HPLC图见图2。
该供试品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 2（S） 4
1 200
2.3.5 重复性试验 称取三七姜乙酸乙酯提取物（编号
1 000
1
S9）0.1 g，精密称定 6 份，分别按“2.3.1（2）”项下方法制 800
mV 600
备供试品溶液，然后按“2.3.2”项下色谱条件进样测定， U， 400
记录色谱图。结果，以2号峰为参照峰，计算得各共有色 200
0
谱峰相对保留时间的RSD均小于0.34％（n＝6）、相对峰 0 10 20 30 40 50 60 70
面积的 RSD 均小于 1.77％（n＝6），表明本方法重复性 t，min
注：1.原儿茶酸；2.对羟基苯甲酸；4.对羟基苯甲醛
良好。
Note：1. protocatechuic acid；2. p-hydroxybenzoic acid；4. p-hy-
2.3.6 HPLC 指纹图谱的生成 分别取 10 批不同产地 droxybenzaldehyde
三七姜乙酸乙酯提取物各0.1 g，按“2.3.1（2）”项下方法 图2 混合对照品的HPLC图
制备供试品溶液，然后按“2.3.2”项下色谱条件进样测 Fig 2 HPLC chromatogram of mixed control
·1724 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 中国药房 2021年第32卷第14期
