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适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。 表1 草果酚酸中原儿茶酚酸和香草酸的加样回收率试
以各待测成分的进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为 验结果（n＝9）
纵坐标进行线性回归。结果，原儿茶酚酸的回归方程为 Tab 1 Results of recovery tests of protocatecholic
Y＝1 483.3X－81.705（r＝0.999 5），香草酸的回归方程 acid and vanillic acid in phenolic acid from
为 Y＝3 182.3X－84.938（r＝0.999 4）。表明，原儿茶酚 A. tsaoko（n＝9）
酸和香草酸检测进样量的线性范围均为0.16～1.60 μg。 待测成分 已知量，μg 加入量，μg 测得量，μg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％
2.2.7 精密度试验 取“2.2.2”项下各单一对照品溶液 原儿茶酚酸 2.712 2 1.356 1 4.075 9 100.56 98.27 1.54
2.980 7 1.490 4 4.449 3 98.54
0.5 mL，用甲醇稀释 40 倍，按“2.2.1”项下色谱条件连续
2.728 9 1.364 5 4.069 6 98.26
进样测定6次，记录峰面积。结果，原儿茶酚酸、香草酸 4.425 7 4.425 7 8.665 5 95.80
峰面积的 RSD 分别为 0.43％、0.35％（n＝6），表明仪器 4.408 3 4.408 3 8.710 8 97.60
4.371 8 4.371 8 8.726 5 99.61
精密度良好。 5.714 6 8.571 9 14.136 5 98.25
2.2.8 重复性试验 取“2.1”项下草果酚酸粗品适量，共 5.631 9 8.447 9 13.780 7 96.46
5.650 4 8.475 6 14.073 5 99.38
6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项
香草酸 0.667 8 0.333 9 0.989 1 96.23 96.52 1.85
下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线法计算 0.656 4 0.328 2 0.963 1 93.44
样品中原儿茶酚酸和香草酸的含量。结果，原儿茶酚 0.672 1 0.336 1 0.997 0 96.68
0.891 1 0.891 1 1.747 0 96.05
酸、香草酸含量的 RSD 分别为 0.92％、0.41％（n＝6），表 0.877 8 0.877 8 1.725 9 96.61
明方法重复性良好。 0.865 7 0.865 7 1.720 7 98.76
1.335 9 2.003 9 3.228 1 94.43
2.2.9 稳定性试验 取“2.2.3”项下供试品溶液适量，分
1.412 5 2.118 8 3.505 4 98.78
别于室温下放置0、2、4、6、12、24 h时按“2.2.1”项下色谱 1.345 4 2.018 1 3.316 5 97.67
条件进样测定，记录峰面积。结果，原儿茶酚酸、香草酸 表2 草果酚酸提取工艺优化的因素与水平
峰面积的 RSD 分别为 0.42％、1.42％（n＝6），表明供试 Tab 2 Factors and levels of extraction technology op-
品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 timization of phenolic acid from A. tsaoko
2.2.10 加样回收率试验 取已知含量的草果酚酸粗品
水平 A，％ B，mL/g C，h
1 g，共 9 份，分别按已知量的 50％、100％、150％加入质 －1 55 4∶1 1.5
量浓度均为 0.032 mg/mL 的原儿茶酚酸、香草酸单一对 0 65 5∶1 2.0
1 75 6∶1 2.5
照品溶液（按“2.2.2”项下方法制备），按“2.2.3”项下方法
表3 草果酚酸提取工艺优化的实验设计方案与结果
处理后，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
Tab 3 Design and results of extraction technology op-
积并计算加样回收率，结果见表1。
timization of phenolic acid from A. tsaoko
2.2.11 样品含量测定 精密称取草果酚酸粗品粉末
试验号 A，％ B，mL/g C，h 原儿茶酚酸，mg/g 香草酸，mg/g 两种成分总含量，mg/g
200 g，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”
1 －1 －1 0 5.20 1.44 6.64
项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线法计 2 －1 0 －1 4.61 1.21 5.83
算样品中原儿茶酚酸、香草酸的含量，每样品平行操作 3 －1 0 1 3.92 1.27 5.19
4 －1 1 0 3.20 1.34 4.54
3次。 5 0 －1 －1 7.35 0.89 8.25
2.3 Box-Behnken设计-响应曲面法优化草果酚酸的提 6 0 －1 1 10.95 2.69 13.64
7 0 0 0 7.16 1.34 8.50
取工艺
8 0 0 0 7.74 2.43 10.17
2.3.1 实验设计与结果 前期预实验发现，由于提取次 9 0 0 0 7.52 1.34 8.87
数为非连续变量，回归处理较困难，结合实际工业生产， 10 0 0 0 8.16 1.27 9.43
11 0 0 0 6.30 1.34 7.63
故确定提取次数为2次。而乙醇体积分数、料液比、提取
12 0 1 －1 9.33 1.38 10.71
时间对原儿茶酚酸、香草酸总含量的影响较明显，故以 13 0 1 1 9.90 2.67 12.57
乙醇体积分数（A，％）、液料比（B，mL/g）、提取时间（C， 14 1 －1 0 6.61 1.21 7.83
15 1 0 －1 7.24 1.69 8.93
h）为考察因素，两种成分的总含量为响应值，根据前期 16 1 0 1 7.11 1.49 8.60
预实验结果每因素设 3 个水平，共设计 17 次实验（其中 17 1 1 0 9.55 1.66 11.21
12次为析因实验，5次为中心点重复实验）。草果酚酸提 2.3.2 模型建立与方差分析 采用 Design Expert 11.0
取工艺优化的因素与水平见表 2，实验设计方案与结果 软件对表3中的总含量数据进行多元回归拟合，得二次
见表3。 多项回归方程为 Y＝8.92+1.80A+0.33B+0.79C+1.37AB+

·1700 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 中国药房 2021年第32卷第14期