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未见采用该法优化草果酚酸提取工艺的报道。基于此，                           解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度均为0.8 mg/mL的
        在前期研究的基础上         [19－20] ，本研究采用高效液相色谱法            单一对照品溶液。量取上述各单一对照品溶液适量至
       （HPLC）同时测定草果提取物中原儿茶酚酸、香草酸的                          同一棕色量瓶中，加甲醇稀释，摇匀，制得原儿茶酚酸、
        含量；同时以乙醇体积分数、液料比、提取时间为考察因                          香草酸质量浓度分别为0.096、0.128 mg/mL的混合对照
        素，原儿茶酚酸和香草酸的总含量为响应值，采用                             品溶液。
        Box-Behnken 设计-响应曲面法优化草果酚酸的提取工                     2.2.3  供试品溶液的制备          取“2.1”项下草果酚酸粗品
        艺，旨在为草果的质量标准完善及其后续的系统开发与                           适量，置于 5 mL 棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
        应用提供科学依据。                                          度，即得供试品溶液。
        1 材料                                               2.2.4  阴性对照溶液的制备           按“2.1”项下方法制备不
        1.1 主要仪器                                           含草果药材的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制得阴性
            本 研 究 所 用 的 主 要 仪 器 包 括 Agilent Infinity Ⅱ     对照溶液。
                                                           2.2.5  系统适用性试验         取上述混合对照品溶液、供试
        1260型HPLC系统及配备的G7111A型高压四元泵带真
                                                           品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件
        空脱气机、G7129A 型自动进样器、G7114A 1260 VWD
                                                           进样测定，记录色谱图。结果，在该色谱条件下，原儿茶
        型检测器、LC-1260 型 2.4.0.628 色谱工作站（美国 Agi-
                                                           酚酸、香草酸的保留时间分别约为5.1、11.9 min，分离度
        lent 公司），BI-800A 型拜杰多功能粉碎机（德清拜杰电
                                                           分别为10.00、2.53，理论板数分别为1 919、4 636；阴性对
        器有限公司），ME204型万分之一分析天平[梅特勒-托利
                                                           照对待测成分的测定无干扰，详见图1。
        多仪器（上海）有限公司]，IKA HB10 型旋转蒸发仪（上
        海万捷科技有限公司）等。                                          250                         2
                                                              200
        1.2  主要药品与试剂                                          150
            原儿茶酚酸对照品（批号 DST191102-081，纯度≥                    mAU  100      1
                                                              50
        98％）、香草酸对照品（批号 DST190706-088，纯度≥
                                                               0
        98％）均购自成都德斯特生物技术有限公司，甲醇（美国                              0  1  2  3  4  5  6  7  8  9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
                                                                                    t，min
        Sigma 公司）为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为蒸                                             A.混合对照品溶液
                                                              10
        馏水。
                                                               8           1
            草果药材（批号 20190920）购自四川新绿色药业科                       mAU  6
        技发展有限公司，经成都医学院药学院李羿教授鉴定为                               4                         2
                                                               2
        姜科豆蔻属多年生草本植物草果 A. tsaoko Crevost et                    0
        Lemaire的干燥成熟果实。                                         0  1  2  3  4  5  6  7  8  9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
                                                                                    t，min
        2 方法与结果                                                                  B.供试品溶液
                                                              10
        2.1  草果酚酸的提取                                           8
            取草果药材粉碎（过二号筛），精密称取粉末 10 g，                        mAU  6
        置于圆底烧瓶中，按一定的液料比（5 ∶ 1，mL/g）加入                          4 2
        65％乙醇，加热回流提取 2 次，每次 1.5～2.5 h，滤过，合                     0
                                                                0  1  2  3  4  5  6  7  8  9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
        并滤液，浓缩蒸干得浸膏；浸膏加浓氨水充分溶解后滤                                                    t，min
        过，滤液用浓盐酸（36％～38％）调pH至2～3，再用乙酸                                           C.阴性对照溶液
                                                               注：1. 原儿茶酚酸；2.香草酸
        乙酯萃取2次，每次120 mL，合并两次乙酸乙酯萃取液，                           Note：1. protocatecholic acid；2. vanillic acid
        浓缩蒸干，即得草果酚酸粗品（每克粗品相当于草果生                           图1    原儿茶酚酸等两种成分的混合对照品、供试品、阴
        药102.60 g）。                                              性对照溶液的高效液相色谱图
        2.2 原儿茶酚酸和香草酸的含量测定                                 Fig 1 HPLC chromatograms of mixed control，test
        2.2.1  色谱条件     以 Eclipse Plus C18 （150 mm×3.0 mm，        sample and negative control of 2 components
        2.7 μm）为色谱柱，以甲醇-0.1％磷酸溶液（13∶87，V/V）为                      as protocatecholic acid
        流动相；流速为 1.0 mL/min；柱温为 40 ℃；检测波长为                  2.2.6  线性关系考察        分别精密吸取“2.2.2”项下各单
        272 nm；进样量为10 μL。                                  一对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，置于 5 mL 棕
        2.2.2  对照品溶液的制备         精密称取原儿茶酚酸、香草               色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得相应质
        酸对照品各适量，分别置于5 mL棕色量瓶中，加甲醇溶                         量浓度的系列对照品溶液。取上述系列对照品溶液各


        中国药房    2021年第32卷第14期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14  ·1699 ·
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