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2.4 色谱和质谱分析 16
14 双环醇
吸取混合标准溶液 100 μL，按照“2.2”“2.3”项下条 12
10
件进样，先经UHPLC分离后再进入质谱分析。首先，由 mAU 8 6 联苯双酯 五味子丙素
4
一级质谱提取离子流（EIC）图得到每个化合物的保留时 2
0
间（RT）和准分子离子的精确m/z值；然后以准分子离子
1 2 3 4 5 6 7 8 9
的m/z值作为靶m/z值，以RT前后0.5 min作为扫描时间 t，min
A. UHPLC-UV图
范围，并在适宜碰撞电压下进行Target MS/MS扫描。经
1.2×10 7
联苯双酯
CID 得到化合物的二级碎片，记录特征碎片离子信息， 1.0×10 7 双环醇
并根据碎片离子m/z值的变化情况，推测其可能的结构。 abundance 0.8×10 7 7
0.6×10
2.5 杂质鉴定 0.4×10 7 五味子丙素
0.2×10 7
吸取双环醇标准溶液 100 μL，按照“2.2”“2.3”项下 0
条件进样分析，并以 80％甲醇作为空白对照。首先经 1 2 3 4 5 6 7 8 9
t，min
UHPLC的紫外（UV）检测，寻找除双环醇色谱峰以外的 B. UHPLC-ESI-Q-TOF-MS图（EIC图）
图 2 双环醇、联苯双酯、五味子丙素的 UHPLC-UV 和
其他特征色谱峰，然后在一级质谱图中查找该色谱峰对
UHPLC-ESI-Q-TOF-MS图
应化合物的 RT 和 m/z 值。二级碎片采集操作同“2.4”
Fig 2 UHPLC-UV and UHPLC-ESI-Q-TOF-MS spec-
项，根据得到的碎片信息结合质谱裂解规律进行杂质的
tra of bicyclol，bifendate and schisandrin C
初步鉴定。
表1 双环醇的主要特征碎片离子信息
2.6 软件辅助分析
Tab 1 Main characteristic fragment ion information
采用Mass Hunter Qualitative Analysis 10.0软件对所
of bicyclol
有化合物的质谱数据进行采集和定性分析。首先，采用
代谢物 主要特征碎片离子 分子式 m/z ppm，×10 －6
软件中的“generate formula”功能，通过限制C、H、O以及 A0 [M+H－H2O] + C19H16O8 373.091 9 －0.18
A1 [A0－CH2O] + 343.081 1 －0.74
不饱和键的数量来确定特征峰对应化合物的分子式；然 C18H14O7
A2 [A1－CHO] + C17H13O6 314.078 4 －0.16
后，使用Molecular Structure Correclator 8.1软件，根据二 A3 [A1－CO2] + C17H14O5 299.091 4 －0.14
级碎片离子信息并结合原型药的分子结构，对碎片离子 A4 [A2－CH2O] + C16H11O5 284.067 4 －1.89
A5 [A3－CO] + C16H14O4 271.096 1 －1.22
的结构进行推测，以辅助裂解过程的推断（上述软件均 A6 [A3－CH2O] + C16H12O4 269.080 6 －0.22
+
来源于美国Agilent公司）。 A7 [A5－CH2O] 或[A6－CO] + C15H12O3 241.049 1 －1.60
A8 [A7－CO] + C14H12O2 213.090 9 －0.29
3 结果与分析
表2 联苯双酯的主要特征碎片离子信息
3.1 3种化合物的色谱和质谱信息
Tab 2 Main characteristic fragment ion information
色谱结果显示，双环醇、联苯双酯和五味子丙素的 of bifendate
RT依次约为3.0、3.9、7.2 min，详见图2。 代谢物 主要特征碎片离子 分子式 m/z ppm，×10 －6
质谱结果显示，随着碰撞电压的增加，双环醇、联苯 B0 [M+H] + C20H18O10 419.239 9 0
B1 [B0－CH4O] + C19H14O9 387.070 6 －0.41
双酯和五味子丙素二级碎片数量也随之增加。在动态
B2 [B1－CH2O] + C18H12O8 357.060 2 －0.88
变化过程中，通过断裂时的电压推断支链结构的稳定 B3 [B1－CO2] + C18H14O7 343.081 3 0.13
B4 [B2－CHO] + 328.057 8 0.25
性，对于分析支链断裂顺序具有重要的指导意义。分析 C17H11O7
B5 [B3－CH2O] + C17H12O6 313.034 3 0.09
二级质谱信息，以质量偏差（ppm）小于2×10 、碎片响应 B6 [B5－CO] + C16H12O5 285.075 7 －0.25
－6
值大于1×10 为标准，归纳双环醇、联苯双酯和五味子丙 表3 五味子丙素的主要特征碎片离子信息
3
素的主要特征碎片离子信息，详见表1～表3。 Tab 3 Main characteristic fragment ion information
3.2 双环醇的质谱裂解途径 of schisandrin C
双环醇在ESI 下产生质子化离子m/z 391.034 1[M+ 代谢物 主要特征碎片离子 分子式 m/z ppm，×10 －6
+
C0 [M+H] + C22H24O6 385.164 6 0.85
H] 为其准分子离子峰。该成分C2位含苄位羟基，会脱 C1 [C0－CH2O] + C21H22O5 355.153 7 －1.49
+
去 1 分子 H2O 产生 m/z 373.091 9 的碎片离子，得到其二 C2 [C0－C5H10] + C17H14O6 315.089 3 －1.09
C3 [C2－CH2O] + C16H12O5 285.075 5 0.91
级质谱拟合图见图3。
C4 [C3－CO] + C15H12O4 257.051 8 0.71
[13]
双环醇的碎裂反应主要由CID引发 ，由图3可知， C5 [C4－CH2O] + C14H10O3 227.069 8 －0.63
·1694 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 中国药房 2021年第32卷第14期