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五味子为木兰科植物五味子 Schisandra chinensis              1 材料
       （Turcz.）Baill.或华中五味子 S. Sphenanthera Rehd. et       1.1 主要仪器
        Wils的干燥成熟果实。因其辛、甘、苦、涩、咸共生五味，                           本研究主要仪器包括Agilent 1290型UHPLC仪（配
        故被称为五味子 。五味子的果实、种子含丰富的木脂                           有G7120A型二元泵及内置脱气机、G7159B型自动进样
                      [1]
        素类化合物，如五味子醇，五味子甲素、乙素、丙素以及                          器、G7116B 型柱温箱、Mass Hunter 10.0 在线分析软件）
                  [2]
        五味子酚等 。经研究发现，所有活性成分中五味子丙                           和 G6545 型 Q-TOF 型 质 谱 仪（美 国 Agilent 公 司）、
        素（结构式见图1A）的保肝作用最强，但含量较低 。为                         CPA-225D 型电子天平（德国 Satorius 公司）、Centrifuge
                                                  [3]
        此，研究者合成了五味子丙素及其衍生物，经筛选后，得                          5804R 型 冷 冻 高 速 离 心 机（德 国 Eppendorf 公 司）、
        到了易于合成且能够大规模生产的联苯双酯（结构式见                           SK5200H 型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）、Re-
        图1B），该衍生物可显著下调乙肝患者的转氨酶水平，但                         search UV型超纯水机（上海和泰仪器有限公司）等。
        具有停药反跳现象 。随后，经过结构优化，研究者合成                          1.2 主要药品与试剂
                        [4]
        了新的衍生物双环醇（结构式见图1C），该衍生物在延续                             双环醇原料药（批号170657，纯度98.0％）购自北京
        联苯双酯保肝作用的同时，其停药反跳现象的发生率远                           协和药厂；联苯双酯对照品（批号 100192-201504，纯度
        低于联苯双酯，故在临床上得到了广泛应用                  [5－6] 。       98.0％）购自中国食品药品检定研究院；五味子丙素对照
                                                           品（批号 MB6954，纯度 98.0％）购自大连美仑生物技术
                                                           有限公司；甲醇和乙腈均购自德国 Merck 公司，均为色
                                                           谱纯；甲酸和乙酸铵均购自上海安谱实验科技有限公
                                                           司，均为分析纯；其余试剂均为分析纯或实验室常用规
                                 ′
                              ′
                                    ′         ′  ′         格，水为自制超纯水。
                                                  ′
                                    ′                      2 方法与结果
                              ′                   ′
                                 ′            ′  ′
                                                           2.1  溶液的配制
                                                               精密称定双环醇原料药、联苯双酯对照品、五味子
            A.五味子丙素          B.联苯双酯           C.双环醇
            图1   五味子丙素、联苯双酯、双环醇的结构式                        丙素对照品各10 mg，分别置于10 mL量瓶中，加入甲醇
        Fig 1  Molecular structure of schisandrin C，bifen-  溶解并定容，超声（功率 200 W，频率 53 kHz，下同）10
               date and bicyclol                           min 使完全溶解，得上述成分质量浓度均为 1 mg/mL 的

            鉴于双环醇具有良好的保肝降酶作用，并且临床上                         贮备液，于 4 ℃下储存。取上述贮备液适量，用 80％甲
        应用广泛，因此研究其有关物质具有重要意义。双环醇                           醇梯度稀释制成质量浓度为 1 μg/mL 的标准溶液，临用
        有关物质的深入研究需通过高分辨质谱分析提供基础                            现配。取上述3种样品的标准溶液各100 μL，置于同一
        信息支撑。电喷雾-四极杆-飞行时间质谱（ESI-Q-TOF-                     EP 管中，超声 5 min 使充分混匀，得到质量浓度均为
        MS）作为高分辨质谱，是通过软电离技术，在测定化合                          0.33 mg/mL的混合标准溶液，备用。
        物精确分子量的同时，提供准确且丰富的碎片信息，尤                           2.2  UHPLC条件
        其适用于未知化合物的结构鉴定 。该技术现已被广泛                               以 Dikma Diamonds C18 （150 mm×4.6 mm，5 μm）为
                                    [7]
        应用于中药、化学药和生物大分子等研究领域                    [8－10] 。关  色谱柱；以 2 mmol/L 乙酸铵-0.1％甲酸溶液为流动相
        于五味子类衍生物的结构鉴定，目前有贺锐锐等 采用                           A、乙腈为流动相 B 进行梯度洗脱（0～1 min，40％B→
                                                  [11]
        Discovery Studio软件探究了五味子乙素质谱裂解途径，                  70％B；1～4 min，70％B；4～4.5 min，70％B→95％B；
        靳茂礼等 对五味子酯甲的代谢产物进行了鉴定，但现                           4.5～8 min，95％B）；流速为 1 mL/min；柱温为 25 ℃；检
                [12]
        有研究并不全面。基于此，本研究采用超高效液相色谱                           测波长为276 nm；进样量为15 μL；分流比为3∶7。

                                                   +
       （UHPLC）-ESI-Q-TOF-MS 法，在正离子模式（ESI ）下，               2.3 质谱条件
        经碰撞诱导解离（CID）获取碎片的二级质谱信息，并以                             离 子 源 为 ESI，扫 描 模 式 为 ESI ；鞘 气 温 度 为
                                                                                             +
        此初步推测五味子丙素、联苯双酯、双环醇的裂解途径，                          350 ℃，流速为 11 L/min；雾化温度为 320 ℃，雾化气电
        从而总结得到这3种化合物的裂解规律，再根据此初步                           压为35 psi；干燥气流速为8 L/min；锥孔电压为65 V；毛
        鉴定双环醇杂质的结构，旨在为双环醇质量控制提供参                           细管电压为175 V；碰撞电压为10～30 V；扫描范围为m/z
        考，也为其他五味子衍生物的结构分析奠定理论基础。                           100～1 700。


        中国药房    2021年第32卷第14期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14  ·1693 ·
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