Page 59 - 《中国药房》2021年13期

壳聚糖氧化石墨烯负载冬凌草甲素对A549细胞增殖及凋亡的影

响 Δ

谢谭芳 ，朱小勇，黄天衍（广西中医药大学药学院/广西高校中药制剂共性技术研发重点实验室/现代中药制剂
＊
工程技术研究中心，南宁 530022）

中图分类号 R285.5；R943 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）13-1589-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.13.09

摘 要 目的：研究壳聚糖氧化石墨烯载体（CS-GO）负载冬凌草甲素（CS-GO-oridonin）对人肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响。
方法：以 A549 细胞为对象，采用 CCK-8 法检测经不同质量浓度的 CS-GO（3、6、12、24、48 μg/mL）和负载了等质量冬凌草甲素的
CS-GO-oridonin（3、6、12、24、48 μg/mL，以冬凌草甲素质量计，下同）作用后的细胞存活率，并计算CS-GO-oridonin的半数抑制浓
度（IC50 ）；采用显微镜观察CS-GO和CS-GO-oridonin（均为32 μg/mL）作用2、4、10、24 h后的细胞形态，并采用荧光标记法观察细胞对
CS-GO、冬凌草甲素、CS-GO-oridonin（均为32 μg/mL）的摄取情况；采用流式细胞术观察不同质量浓度CS-GO（16、32、64 μg/mL）
和CS-GO-oridonin（16、32、64 μg/mL）作用后细胞的凋亡情况及细胞中活性氧（ROS）的含量，采用Western blot法检测细胞中抗凋
亡相关蛋白[髓样细胞白血病1（Mcl-1）、Bax、Bak]蛋白的表达情况。结果：经不同质量浓度CS-GO作用后，细胞的存活率仍不低
于 90％；经不同质量浓度 CS-GO-oridonin 作用后，细胞存活率呈下降趋势，且显著低于相同质量浓度的 CS-GO 组（P＜0.01）；
CS-GO-oridonin的IC50为32.61 μg/mL。经CS-GO作用后，细胞形态未见明显改变；经CS-GO-oridonin作用后，细胞出现皱缩、成团
脱落、悬浮物增多等现象；当细胞摄取冬凌草甲素和CS-GO-oridonin后，其荧光均较摄取CS-GO的细胞有所增强。与空白组比较，
CS-GO 16、32、64 μg/mL组细胞的凋亡率和细胞中ROS含量、凋亡相关蛋白的表达水平均无显著变化（P＞0.05）；而CS-GO-oridonin
16、32、64 μg/mL组细胞的凋亡率、细胞中ROS含量和Bax、Bak蛋白的表达水平均显著升高，Mcl-1蛋白的表达水平均显著降低，
且上述指标水平均显著高于或低于同质量浓度 CS-GO 组（P＜0.05）。结论：CS-GO 不会影响 A549 细胞的增殖及凋亡；CS-GO-
oridonin对细胞有明显的抑制和促凋亡作用，这种作用可能与增加细胞中ROS的产生、调控凋亡相关蛋白的表达有关。
关键词 壳聚糖氧化石墨烯载体；冬凌草甲素；A549细胞；增殖；凋亡

Effects of Oridonin-loaded Chitosan Graphene Oxide on the Proliferation and Apoptosis of A549 Cells
XIE Tanfang，ZHU Xiaoyong，HUANG Tianyan（School of Pharmacy， Guangxi University of TCM/Key
Laboratory of Common Technology of Traditional Chinese Medicine Preparation in Universities of Guangxi/
Modern Chinese Medicine Preparation Engineering Technology Research Center，Nanning 530022，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effects of chitosan graphene oxide carrier （CS-GO） loaded with oridonin （CS-GO-
oridonin） on the proliferation and apoptosis of human lung cancer A549 cells. METHODS：Taking A549 cells as objects，the
survival rate of cells were detected by CCK-8 method after treated with different concentrations of CS-GO（3，6，12，24，48
μg/mL）and CS-GO-oridonin loaded with same mass of oridonin（3，6，12，24，48 μg/mL，by the weight of oridonin，the same
below）. IC50 of CS-GO-oridonin was calculated. The cell morphology were observed by microscope after treated with CS-GO and
CS-GO-oridonin（both 32 μg/mL）for 2，4，10，24 h. The uptake of CS-GO，oridonin，CS-GO-orionin（all 32 μg/mL）by cells
was observed with fluorescence labeling method. The apoptosis of cells and the content of ROS were observed by flow cytometry
after treated with different concentrations of CS-GO（16，32，64 μg/mL）and CS-GO-oridonin（16，32，64 μg/mL）. The expression
of anti-apoptosis related proteins（Mcl-1，Bax and Bak）were detected by Western blot. RESULTS：After treated with different
concentrations of CS-GO， the survival rate of cells was still above 90％ ； after treated with different concentrations of
CS-GO-oridonin，the survival rate of cells showed a downward trend，and was significantly lower than that of CS-GO group（P＜
0.01）；IC50 of CS-GO-oridonin was 32.61 μg/mL. After CS-GO treatment，the cell morphology did not change significantly；after
CS-GO-oridonin treatment，the cells shrunk and fell off in clusters，and the suspended matter increased；the fluorescence of
oridonin and CS-GO-orionin taken up by cells was enhanced than CS-GO. Compared with blank group，there was no significant
change in the apoptosis rate，the content of ROS and the expression of apoptosis-related protein in 16，32，64 μg/mL CS-GO
groups （P＞0.05）；apoptosis rate，the content of ROS，the
Δ 基金项目：广西高校中青年教师基础能力提升项目（No.
protein expression of Bax and Bak in 16，32，64 μg/mL CS-
2017KY0292）；广西高校中药制剂共性技术研发重点实验室课题
（No.70-ZJGX2017003） GO-oridonin groups were increased significantly，while the
＊主管药师，硕士。研究方向：药物新剂型、新制剂的研发。电 protein expression of Mcl-1 were decreased significantly.
话：0771-4953513。E-mail：xietanfang111@163.com Above indexes were significantly higher or lower than the

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