Page 54 - 《中国药房》2021年13期
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物质基础     [14－15] ，且其具有广泛的生理活性，是生物细胞                     表1 半夏野生品和栽培品药材样品来源信息
        维持生命活动的基本组成，参与 DNA 代谢过程，具有抗                             Tab 1 Origins of wild and cultivated P. ternate
        肿瘤、抗病毒、免疫调节、改善脑细胞代谢、镇静中枢神                            编号    采集地         品种    编号     采集地        品种
        经、抗血小板凝集、抗心律失常和抗惊厥等多种生物活                             ZP1   湖北省荆门市      栽培    ZP11   河北省安国市     栽培
        性 。在2020年版《中国药典》（一部）中，半夏并无含量                         ZP2   湖北省荆门市      栽培    ZP12   河北省安国市     栽培
          [16]
                                                             ZP3   湖北省荆门市      栽培    YS1    江西省南昌市     野生
        测定相关的要求，仅对其中4种氨基酸（精氨酸、丙氨酸、
                                                             ZP4   湖北省潜江市      栽培    YS2    重庆市大足区     野生
                                       [17]
        缬氨酸、亮氨酸）进行薄层色谱鉴别 ；且笔者在前期预                            ZP5   湖北省荆州市      栽培    YS3    重庆市垫江县     野生
        实验中发现，采用薄层色谱法并不能鉴别野生半夏及其                             ZP6   湖北省宜昌市      栽培    YS4    重庆市垫江县     野生
        栽培品。因此，考虑增加半夏中核苷类成分的含量测定                             ZP7   贵州省威宁县      栽培    YS5    重庆市垫江县     野生
                                                             ZP8   贵州省威宁县      栽培    YS6    重庆市垫江县     野生
        项以更好地评价半夏的质量。但野生半夏和其栽培品
                                                             ZP9   贵州省赫章县      栽培    YS7    江西省南昌市     野生
        是否可通过核苷类成分进行区分尚不明确。                                  ZP10  贵州省赫章县      栽培    YS8    江西省南昌市     野生
            化学模式识别法是化学计量学的重要组成部分，也
                                                            4.6 mm，3 μm）；流动相为水（A）-甲醇（B）溶液，梯度洗
        是筛选中药质量标志物的重要数学方法，可划分为无监
                                                            脱（0～6 min，2％B；6～8 min，2％B→5％B；8～15 min，
        督的模式识别（包括聚类分析、主成分分析）和有监督的
                                                            5％B→10％B；15～20 min，10％B→30％B；20～30 min，
        模式识别[偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）] 。基
                                                  [18]
                                                            30％B→80％B；30～50 min，80％B；50～52 min，80％
        于此，笔者拟采用高效液相色谱法（HPLC）建立同时测
                                                            B→2％B）；采用 DAD，检测波长为 265 nm；流速为 1.0
        定半夏中 8 种核苷酸类成分（尿嘧啶、尿苷、肌苷、黄嘌
                                                            mL/min；柱温为30 ℃；进样量为5 μL。
        呤、腺嘌呤、鸟苷、β-胸苷和腺苷）的含量；并以上述 8 种
                                                            2.1.2  对照品溶液的制备          精密称取尿嘧啶、黄嘌呤、
        核苷类成分的含量为基础，采用化学模式识别法分析野
                                                            尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、β-胸苷、腺苷对照品适量，置
        生半夏及其栽培品中核苷类成分差异，以期为野生半夏
                                                            于同一 10 mL 量瓶中，加水超声（功率 200 W，频率 50
        及其栽培品的质量控制提供参考。
                                                            kHz，下同）溶解后定容，制成上述 8 种成分质量浓度分
        1 材料
                                                            别为101、100、99、101、99、100、99、98 μg/mL的混合对照
        1.1  主要仪器
                                                            品贮备液。精密量取上述混合对照品贮备液2 mL，置于
            1260 型 HPLC 仪，配有 G1329B 自动控温自动进样
                                                            10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，即得混合对照品溶液。
        器、G1312B 二元泵、G1362A 柱温箱、G1315D 二极管阵
                                                            另分别取上述8种成分对照品适量，加水稀释制成质量
        列检测器（DAD）和 Agilent OpenLAB CDS 数据处理工
                                                            浓度均为10 μg/mL的单一对照品溶液。
        作站，购自美国 Agilent 公司；BP121S 型万分之一电子
                                                            2.1.3  供试品溶液的制备          取半夏药材粉末（过 60 目
        天平购自德国 Sartorius 公司；KQ-500DB 型数控超声波
        清洗器购自昆山市超声仪器有限公司；ST8R 型离心机                          筛）1 g，精密称定，加水 10 mL，超声提取 45 min，放冷，
        购自美国Thermo Fisher Scientific公司。                     以4 500 r/min离心10 min，取上清液，经0.22 μm微孔滤
        1.2  主要药品与试剂                                        膜滤过，即得。
            本研究所用半夏野生品和栽培品药材采自全国7个                          2.1.4  专属性试验       分别精密吸取“2.1.2”项下混合对
        省或直辖市，由济宁医学院药学院王建安教授鉴定为天                            照品溶液和“2.1.3”项下供试品溶液（编号ZP8）各5 μL，
        南星科植物半夏P. ternata（Thunb.）Breit.的干燥块茎（样              按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，
        品来源信息见表1）；尿嘧啶对照品（批号C10668189，纯                      尿嘧啶、尿苷、肌苷、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟苷、β-胸苷和腺
        度 99％）、尿苷对照品（批号 C10633868，纯度 99％）、肌                 苷的色谱峰峰形均较好，且分离度均大于1.5，理论板数
        苷对照品（批号 C10443696，纯度 98％）、黄嘌呤对照品                    以黄嘌呤峰计不低于3 000，详见图1。
        （批号 C10830281，纯度 98％）、腺嘌呤对照品（批号                     2.1.5  线性关系、定量限和检测限考察              分别精密吸取
        C10492152，纯度 98％）、鸟苷对照品（批号 C10079911， “2.1.2”项下混合对照品贮备液2、1、0.5、0.1、0.05 mL，置

        纯度99％）、β-胸苷对照品（批号C10080693，纯度99％）                   于 10 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。分别精密吸
        和腺苷对照品（批号C10825934，纯度99％）均购自上海                      取上述系列溶液适量，按“2.1.1”项下色谱条件进样分
        麦克林生化科技有限公司；其余试剂为实验室常用规                             析，记录色谱图。以 8 种核苷类成分的质量浓度（x，
        格，甲醇为色谱纯，水为超纯水。                                     μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行回归分析。
        2 方法与结果                                             另外，取“2.1.2”项下8种核苷类成分的单一对照品溶液，
        2.1  半夏野生品和栽培品药材中 8 种核苷类成分的含                        以水逐级稀释，再按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记
        量测定                                                 录色谱图，以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 分别计算定量限（LOQ）
        2.1.1  色谱条件      色谱柱为 Phenomenex C18 （150 mm×       和检测限（LOD），结果见表2。


        ·1584 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13                                 中国药房    2021年第32卷第13期
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