Page 60 - 《中国药房》2021年13期
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same concentration CS-GO group（P＜0.05）. CONCLUSIONS：CS-GO dose not affect the proliferation and apoptosis of A549
        cells；CS-GO-oridonin has obvious inhibition and apoptosis promoting effect on cells，which may be related to increasing ROS
        production and regulating the expression of apoptosis related proteins.
        KEYWORDS     Chitosan graphene oxide carrier；Oridonin；A549 cells；Proliferation；Apoptosis


            肺癌是全世界最常见的肿瘤之一，是多因素、多基                          清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、SW-CJ-1D 型超净
        因共同作用所导致的恶性肿瘤              [1－2] 。目前，对于肺癌患          工作台（苏州智净净化设备有限公司）、BSC-1300ⅡB2
        者的临床治疗，西医一般采用手术切除、放疗、化疗等方                           型生物安全柜[西班泰克净化设备（苏州）有限公司]、311
        法。而对于大部分不适合手术切除的实体肿瘤患者，化                            型 CO2恒温培养箱和 F3 型移液器（美国 Thermo Fisher
        疗常被作为其首选治疗方法，但化疗的毒副作用较大，                            Scientific 公司）、DMIL LED 型倒置荧光显微镜（德国
        导致患者常会出现恶心呕吐等毒副反应、生存质量明显                            Leica 公司）、AMR-100 型酶标仪（杭州奥盛仪器有限公
        下降   [3－4] 。中医药在治疗慢性疾病和疑难杂症方面有                      司）、NovoCyte 型 流 式 细 胞 仪（美 国 Agilent 公 司）、
        独特优势，且毒副作用较少；同时，中药联合化疗可有效                           Tanon-5200型全自动化学发光分析仪（上海天能科技有
        改善患者的生存质量，降低其恶心呕吐的发生率，疗效                            限公司）等。
        好且安全可靠       [5－6] 。由此可见，中西医结合可在肺癌治                 1.2 主要药品与试剂
        疗领域中发挥重要作用，已成为目前学者关注的热点                                 冬凌草甲素对照品（批号 MUST-19011510，纯度
        之一 。                                                99.64％）购自成都曼思特生物科技有限公司；GO（厚度
            [5]
            冬凌草甲素（oridonin）是从唇形科植物碎米桠Rab-                   0.8～1.2 nm，单层）购自南京先丰纳米材料科技有限公
        dosia rubescens（Hemsl.）Hara 中分离得到的一种贝壳杉             司；CS（乙酰度 87.2％，分子量 161.1 Da）购自南通兴成
        烷类二萜化合物，具有较强的抗肿瘤活性，对多种肿瘤                            生物制品厂；透析袋（截留分子量14 000 Da）购自北京白
        细胞均有显著的抑制或杀伤作用               [7－8] 。但由于该化合物         鲨易科技有限公司；F12K 培养基、胎牛血清（批号分别
        水溶性差、生物利用度低等原因，使得其临床应用受到                            为 21127-022、10270-106）均购自美国 Gibco 公司；磷酸
                  [9]
        一定的限制 。因此，若能克服上述不足，则将有助于该                           盐缓冲溶液（PBS，pH 7.4）、0.25％胰蛋白酶、CCK-8 试
        化合物在抗肿瘤领域的进一步应用。有研究表明，适宜                            剂、流式细胞仪专用binding buffer、兔髓样细胞白血病1
        的药物载体可明显提高冬凌草甲素的生物利用度 。                            （Mcl-1）多克隆抗体、兔 Bax 多克隆抗体、兔 Bak 多克隆
                                                     [10]
        氧化石墨烯（graphene oxide，GO）是石墨烯经氧化超声                   抗体、兔甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）多克隆抗体、辣
        处理后所得的产物，其结构表面和边缘都存在含氧官能                            根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G
        团，其中的氧原子易与水形成氢键，能很好地分散于水                           （IgG）二抗（批号分别为C1741、C1812、C1706、CY1698、
        中，从而增加药物的亲水性；同时，GO表面积大、载药量                          202009、202008、202009、202009、202008）均购自武汉贝
        高、表面含氧官能团丰富且结构易于修饰，是一种很好                            茵莱生物科技有限公司；膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素/
                   [11]
        的药物载体 。壳聚糖（chitosan，CS）的结构中有许多                      碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）凋亡检测试剂盒（批号
        氨基和羟基，具有生物相容性和生物降解性好、无毒性                            556547）购自美国BD公司；FITC试剂（货号46950）购自
                   [12]
        等独特优势 。CS 修饰 GO 得到的 CS-GO 载体具有良                     美 国 Sigma 公 司 ；2′，7′- 二 氯 二 氢 荧 光 素 二 乙 酸 酯
                                                     [13]
        好的水溶性和生物相容性，可用于负载抗肿瘤药物 。                           （DCFH-DA）、活 性 氧（ROS）检 测 试 剂 盒（货 号 均 为
        基于此，本研究利用 CS-GO 作为载体负载冬凌草甲素                         S0033）均购自碧云天生物技术有限公司；蛋白质Marker
        （即 CS-GO-oridonin），初步考察其对人肺癌细胞 A549                （批号 P12103）购自美国 Helix 公司；抗荧光萃灭封片
        增殖、凋亡的影响以及可能机制，为该化合物新型抗肿                            剂[含 4′，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）]、十二烷基硫酸钠
        瘤制剂的研发提供理论和技术支持，为肺癌的临床治疗                           （SDS）、四甲基乙二胺（TEMED）、BCA蛋白浓度测定试
        提供参考。                                               剂盒（批号分别为S2110、S8010、T8090、PC0020）均购自
        1 材料                                                北京索莱宝科技有限公司；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、电
        1.1 主要仪器                                            化 学 发 光（ECL）试 剂（ 批 号 分 别 为 IPVH00010、
            本研究所用主要仪器包括 SQP JP-04 型电子天                      1930802）均购自美国Millipore公司；其余试剂均为分析
        平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]、HWCL-3 型磁                       纯或实验室常用规格，水为超纯水。
        力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）、TGL-16M型离心                        1.3 细胞
        机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）、Epsilon 2-4 型                        人肺癌细胞A549来源于中国科学院上海细胞库/干
        冷冻干燥机（德国LSC Christ公司）、KQ3200B型超声波                   细胞库。


        ·1590 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13                                 中国药房    2021年第32卷第13期
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