Page 55 - 《中国药房》2021年13期

40 2.1.8 重复性试验 精密称取同一批半夏药材粉末（编
35
30 1 号ZP8，过60目筛），共6份，按“2.1.3”项下方法制备供试
25
8 品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面
mAU 20 2
15
10 3 7 积，并按外标法计算含量。结果，尿嘧啶、黄嘌呤、尿苷、
5 4 6 腺嘌呤、肌苷、鸟苷、β-胸苷和腺苷的平均含量分别为
5
0
－5 0.19、0.18、0.14、0.06、0.13 、0.17、0.05、0.16 mg/g，RSD分
0 5 10 15 20 25 30 35 40 别为 1.1％、1.3％、1.5％、0.86％、1.5％、1.3％、0.98％、
t，min
A.混合对照品溶液 1.1％（n＝6），表明该方法重复性良好。
40 2.1.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的半夏药
35
30 材粉末（编号ZP8，过60目筛）6份，每份0.5 g，分别加入
25 与样品中待测成分含量相当的尿嘧啶、黄嘌呤、尿苷、腺
mAU 20 嘌呤、肌苷、鸟苷、β-胸苷、腺苷的对照品，按照“2.1.3”项
15
10 8
5 3 下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样
1 7
0 2 4 5 6 分析，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表3。
－5
0 5 10 15 20 25 30 35 40 2.1.10 样品含量测定 取 20 批半夏药材，按“2.1.3”项
t，min 下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下方法进样测
B.供试品溶液（编号ZP8）
定，采用外标法计算8种核苷类成分的含量。每批样品
注：1. 尿嘧啶；2. 尿苷；3. 肌苷；4. 黄嘌呤；5. 腺嘌呤；6. 鸟苷；7. β-
胸苷；8. 腺苷 平行测定3份，取平均值，结果见表4。
Note：1. uracil；2. uridine；3. inosine；4. xanthine；5. adenine；6. gua- 2.2 化学模式识别分析
nosine；7. β-thymidine；8. adenosine 2.2.1 聚类分析 采用 SPSS 25.0 软件，将 20 批半夏药
图1 专属性试验的高效液相色谱图 材中8种核苷类成分的含量作为变量，采用平方欧氏距
Fig 1 HPLC chromatogram of specificity tests 离和组间联接法进行聚类分析，结果见图 2。由图 2 可

表 2 8 种核苷类成分的回归方程、线性范围、定量限和 知，当平方欧氏距离为 25 时，20 批样品聚为 2 类：样品
检测限考察结果 ZP1～ZP12号聚为第一类，均为栽培品；样品YS1～YS8
Tab 2 Linear equation，linear range，quantitation 聚为第二类，均为野生品。由此说明，野生半夏和其栽
limit and detection limit of 8 nucleoside 培品中核苷类成分的含量存在明显差异。
成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL LOD，μg/mL LOQ，μg/mL 2.2.2 主成分分析 采用 SPSS 25.0 软件建立 20 批半
尿嘧啶 y＝20.253x+3.469 4 0.999 9 0.51～101.00 0.05 0.1 夏药材的8种核苷类成分的含量数据矩阵，经标准化后，
黄嘌呤 y＝13.741x+0.222 5 0.999 9 0.50～100.00 0.3 0.4 采用 SIMCA-P 14.1 软件进行主成分分析，以特征值＞1
尿苷 y＝16.763x－0.876 1 0.999 9 0.50～99.00 0.1 0.2
腺嘌呤 y＝23.019x－2.963 4 0.999 9 0.51～101.00 0.15 0.4 为标准，得到 2 个主成分，累积方差贡献率为 79.333％
肌苷 y＝6.551x+1.840 9 0.999 9 0.50～99.00 0.2 0.4 （表 5），表明 2 个主成分能较好地解释原有变量所包含
鸟苷 y＝11.954x+5.145 4 0.999 9 0.50～100.00 0.2 0.4 的信息；同时得到8种核苷类成分的主成分矩阵（表6）、
β-胸苷 y＝11.886x+6.260 9 0.999 7 0.50～99.00 0.1 0.2
腺苷 y＝18.664x+1.777 5 0.999 9 0.49～98.00 0.05 0.1 主成分得分图（图 3）和主成分载荷图（图 4）。另以 8 种
2.1.6 精密度试验 精密吸取“2.1.2”项下混合对照品 核苷类成分的含量作为变量，建立主成分分析模型，模
2
溶液5 μL，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰 型解释率R X＝0.765（该值大于0.5，说明建立的模型具
[19]
面积。结果，尿嘧啶、黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、 有较高的预测准确率 ）。由表 6 可知，腺嘌呤、鸟苷和
β- 胸 苷 、腺 苷 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.26％ 、0.31％ 、 腺苷对主成分 1 具有较高的载荷，尿苷和β-胸苷对主成
0.33％、0.10％、0.38％、0.39％、0.27％、0.10％（n＝6），表 分 2 具有较高的载荷。由图 3、图 4 可知，半夏野生品与
明仪器精密度良好。 栽培品各自聚为一类，说明不同生长条件的半夏中的核
2.1.7 稳定性试验 精密称取同一批半夏药材粉末（编 苷类成分含量存在明显差异；野生品中鸟苷、尿苷、腺
号 ZP8，过 60 目筛），按“2.1.3”项下方法制备供试品溶 苷、腺嘌呤为其主要的特征标志物，栽培品中β-胸苷、肌
液，于室温条件下放置0、3、6、9、12、24 h 后，按“2.1.1”项 苷、黄嘌呤、尿嘧啶为其主要的特征标志物。
下色谱条件进样分析，记录峰面积。结果，尿嘧啶、黄嘌 2.2.3 OPLS-DA 分析 在主成分分析的基础上，将 20
呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、β-胸苷、腺苷峰面积的 批半夏药材中 8 种核苷类成分的含量数据导入 SIMCA
RSD 分别为 1.3％、0.84％、0.91％、1.1％、1.2％、0.91％、 14.1软件中，建立OPLS-DA模型（其得分图见图5）。结
2
2
0.88％、0.83％（n＝6），表明供试品溶液在室温放置24 h 果显示，数据矩阵模型质量参数 R X＝0.95、R Y＝0.94，
内稳定性良好。 模型预测参数Q ＝0.87（其中，R X表示概况X矩阵的结
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中国药房 2021年第32卷第13期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13 ·1585 ·