Page 36 - 《中国药房》2021年13期

acid group and positive control group（P＜0.05 or P＜0.01）；early apoptotic rate（except for ferulic acid group），late apoptotic
rate，the protein expression of caspase-3 and ZBP-89（except for positive control group）were increased significantly（P＜0.05 or
P＜0.01）. The results of molecular docking showed that the carboxylic groups of ferulic acid could interact with 1.9 Å hydrogen
bond of Asn581 and 2.0 Å hydrogen bond of Lys591，with binding energy of －4.4 kcal/mol. CONCLUSIONS：Ferulic acid may
inhibit the activity of p-STAT3 by directly binding to the phosphorylation site of STAT3；it may up-regulate the protein expression
of caspase-3 via STAT3 dependent pathway，or up-regulate the protein expression of ZBP-89 via STAT3 independent pathway and
then down-regulate the protein expression of vimentin，so as to inhibit the proliferation，invasion and apoptosis of HepG2 cells.
KEYWORDS Ferulic acid；HepG2 hepatocellular carcinoma cell；STAT3；Caspase-3；Vimentin

原发性肝癌是全球第六大常见癌症，2020年其新发 1.2 主要药品与试剂
病例约 90.6 万，病死病例约 83 万；其中最常见的是肝细 本研究所用主要药品与试剂有高糖 DMEM 培养
胞癌，约占原发性肝癌的75％～85％ 。 基、Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒（美国 Wisent 公
[1]
阿魏酸是来源于阿魏和当归等中药的一种酚酸类 司，批号分别为 319006023、A211-01），0.25％胰蛋白酶、
成分，其性质稳定、毒性低，具有解毒、保肝等作用，且可 胎 牛 血 清（美 国 Gibco 公 司 ，批 号 分 别 为 2120917、
有效抑制肝癌细胞的生长、促进肝癌细胞的凋亡 [2－3] ，但 2148169CP），p-STAT3抑制剂C188-9（美国Mce公司，批
其抗肝癌的分子机制及作用靶点尚未完全明确。研究 号 31595），CCK-8 细胞增殖检测试剂盒（南京诺唯赞生
表明，信号转导蛋白及转录激活子 3（STAT3）和波形蛋 物科技有限公司，批号7E271E8），Matrigel基质胶（美国
白（vimentin）均在肝癌组织或肝癌细胞株中过度表达， BD 公司，批号 354234），十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺
并作为一种重要的信号分子和转录因子，参与肝癌细胞 （SDS-PAGE）凝胶快速配制试剂盒（上海碧云天生物技
的快速增殖、侵袭和转移 [4－6] 。当肝癌细胞受到刺激后， 术有限公司，批号 120319191206），Transwell 小室（美国
促进白细胞介素 6（IL-6）等炎症因子激活 STAT3 的磷 Corning公司，批号09420061），阿魏酸（成都曼斯特生物
酸化 [7 － 8] ，然后磷酸化 STAT3（p-STAT3）以二聚体的形 科技有限公司，批号MUST-20060511，纯度≥98％），人重
式转入细胞核，调控细胞凋亡关键分子胱天蛋白酶 3 组因子 IL-6（美国 Peprotech 公司，批号 0215102c2793），
（caspase-3）或抑癌因子锌指蛋白（ZBP-89），进而增强 BCA 蛋白定量试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司，
vimentin表达，从而促进肝癌细胞增殖、侵袭并抑制其凋 批号 14G08A46），ECL 发光试剂盒（北京中杉金桥生物
亡 [9－12] 。但阿魏酸是否可通过STAT3-vimentin信号通路 技术有限公司，批号 7E34E9），RIRA 裂解液（北京索莱
发挥抗肝癌作用尚不明确。 宝生物技术有限公司，批号20190922），蛋白磷酸酶抑制
基于此，本研究利用人重组因子 IL-6 诱导 p-STAT3 剂（杭州弗德生物科技有限公司，批号 20200114），兔源
高表达的人肝癌 HepG2 细胞模型，以 p-STAT3 抑制剂 caspase-3 多克隆抗体、兔源 p-STAT3 单克隆抗体（美国
[13]
C188-9 为阳性对照 ，基于 STAT3-vimentin 信号通路探 CST 公司，批号分别为 34、18），兔源 GAPDH 多克隆抗
讨阿魏酸对 HepG2 细胞增殖、侵袭和凋亡的影响，并结 体、兔源STAT3多克隆抗体、兔源vimentin多克隆抗体、
合分子对接技术预测阿魏酸与STAT3的结合位点，探讨 山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（武汉三鹰生物技术
阿魏酸抗肝癌作用的靶点与分子机制，以期为其临床应 有限公司，批号分别为 00078427、00081195、00086320、
用提供实验基础。 20000217），兔源 ZBP-89 多克隆抗体（北京博奥森生物
1 材料 技术有限公司，批号 AC07172366）；其余试剂为实验室

1.1 主要仪器 常用规格，水为纯净水。
本研究所用主要仪器有MCO-18AIC型 CO2细胞培 1.3 细胞
养箱（日本 Sanyo 公司），Epoch 型全波长酶标仪（美国 本研究所用人肝癌细胞株 HepG2 由广西中药药效
BioTek 公司），LSRFortessa 型流式细胞仪（美国 BD 公 研究重点实验室提供。
司），PowerPac TM Universal Power Supply 型电泳仪、全 2 方法
能型成像分析系统（美国 Bio-Rad 公司），垂直式电泳槽 2.1 细胞培养
和转膜仪（北京六一生物技术有限公司），MDF-U7386S 采用含 10％胎牛血清的高糖 DMEM 培养基（以下
型超低温冰箱、ST 16R型高速离心机（美国Thermo Fisher 简称培养基）于 37 ℃、5％CO2 的培养箱中常规培养
Scientific公司）等。 HepG2 细胞。当细胞生长至 80％时，向培养瓶中加入

·1566 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13 中国药房 2021年第32卷第13期