Page 38 - 《中国药房》2021年13期

1 000）、caspase-3一抗（稀释度为1∶1 000），孵育过夜；以 表1 不同浓度阿魏酸干预12、24、48 h后的细胞存活率
TBST洗膜30 min，加入二抗（稀释度为1 ∶ 5 000），孵育1 测定结果（x±±s，n＝3，％％）
h；以TBST洗膜30 min，加入显影液，经凝胶成像系统成 Tab 1 Survival rate of HepG2 cells intervened by fe-
像。采用Image J v1.8.0软件进行分析，以p-STAT3蛋白 rulic acid at different concentrations for 12，
灰度值与 STAT3 蛋白灰度值的比值表示 STAT3 的磷酸 24，48 h（x±±s，n＝3，％％）
化程度，以ZBP-89、vimentin 、caspase-3蛋白灰度值与内 组别 12 h 24 h 48 h
参蛋白GAPDH的灰度值的比值表示其表达水平。 空白对照组 100.000±18.869 100.000±6.265 100.000±4.795
阿魏酸0.125 mmol/L组 98.345±5.895 98.759±8.251 93.464±6.643
2.9 阿魏酸与STAT3蛋白的分子对接分析 阿魏酸0.25 mmol/L组 97.725±10.902 97.949±19.910 92.991±8.996
通过 PDB 蛋白数据库（https：//www.rcsb.org/）获得 阿魏酸0.5 mmol/L组 94.623±4.659 95.223±4.677 86.425±1.149 ＊
阿魏酸1 mmol/L组 93.630±4.955 90.781±5.330 83.489±2.591 ＊＊
STAT3 蛋白分子 4 个高度相似的晶体结构（PDB 条目分
阿魏酸2 mmol/L组 82.544±16.130 77.447±7.137 ＊ 75.648±6.856 ＊＊
别为4E68、1BG1、6QHD、3CWG）。通过查阅文献发现， 阿魏酸4 mmol/L组 67.239±8.309 ＊＊ 65.631±7.434 ＊＊ 62.544±7.019 ＊＊
抑制剂 C188-9 主要通过作用于 STAT3 蛋白的 SH2 结构 注：与空白对照比较，P＜0.05， P＜0.01
＊
＊＊
[13]
＊
域，抑制 Tyr705 位点的磷酸化 。因此，笔者假定该结 Note：vs. blank control，P＜0.05， P＜0.01
＊＊
构域为阿魏酸与 STAT3 蛋白的结合位点，以 1BG1 为对
接模板、以 Tyr705 周围的区域为假定的结合口袋（包括 p-STAT3 89 kDa
氨基酸Lys591、Arg609、Phe610、Ser611、Ser613、Thr620、
STAT3 89 kDa
Ser636、Val637、Pro639），进行分子对接分析。
2.10 统计学分析
GAPDH 36 kDa
采用 SPSS 17.0 软件进行统计分析。将符合正态分
IL-6 25
IL-6 50
布的数据以 x±s 表示，采用单因素方差分析；不符合正 空白对照组 IL-6 12.5 ng/mL组 ng/mL组 IL-6 100 IL-6 200
ng/mL组
ng/mL组
ng/mL组
态分布的数据采用秩和检验。P＜0.05表示差异有统计 图 1 不同浓度 IL-6 诱导后 HepG2 细胞中 p-STAT3、
学意义。 STAT3蛋白表达的电泳图
3 结果 Fig 1 Electrophoretogram of protein expression of p-
3.1 阿魏酸干预时间和给药浓度的筛选结果 STAT3 and STAT3 in HepG2 cells induced by
阿魏酸干预 12 h 后，与空白对照组比较，阿魏酸 4 different concentrations of IL-6
mmol/L 组细胞存活率显著降低（P＜0.01），阿魏酸其余 表 2 不同浓度 IL-6 诱导后 HepG2 细胞中 p-STAT3/
浓度组细胞存活率差异无统计学意义；阿魏酸干预24 h STAT3比值的测定结果（x±±s，n＝3）
后，与空白对照组比较，阿魏酸 2、4 mmol/L 组细胞存活 Tab 2 Ratio p-STAT3/STAT3 in HepG2 cells induced
率显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）；阿魏酸干预 48 h 后， by different concentrations of IL-6（x±±s，n＝3）
与空白对照组比较，阿魏酸0.5、1、2、4 mmol/L组细胞存 组别 p-STAT3/STAT3 组别 p-STAT3/STAT3
活率均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01），详见表 1。基于 空白对照组 0.552±0.052 IL-6 50 ng/mL组 1.113±0.068 ＊＊
IL-6 12.5 ng/mL组 0.515±0.071 ##□□ IL-6 100 ng/mL组 1.108±0.158 ＊＊
此，本研究采用以0.5 mmol/L 阿魏酸干预48 h的条件进
IL-6 25 ng/mL组 0.917±0.045 ＊＊#□ IL-6 200 ng/mL组 0.701±0.050 ＊##□□
行后续试验。
注：与空白对照比较，P＜0.05， P＜0.01；与IL-6 50 ng/mL组比
＊＊
＊
3.2 IL-6造模浓度的筛选结果 较，P＜0.05，P＜0.01；与 IL-6 100 ng/mL 组比较， P＜0.05， P＜
##
#
□ □
□
与空白对照组比较，IL-6 25、50、100、200 ng/mL 组 0.01
细胞中p-STAT3/STAT3比值均显著升高（P＜0.05或P＜ Note：vs. blank control， P＜0.05， P＜0.01；vs. IL-6 50 ng/mL
＊ ＊
＊
##
#
□
□□
0.01）；与 IL-6 50、100 ng/mL 组比较，IL-6 其余浓度组细 group，P＜0.05，P＜0.01；vs. IL-6 100 ng/mL group，P＜0.05， P＜
0.01
胞中 p-STAT3/STAT3 比值均显著降低（P＜0.05 或 P＜
0.01），但 IL-6 50、100 ng/mL 两组间比较差异无统计学 组细胞存活率均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；与阳性
意义（P＞0.05）。基于此，后续试验采用 50 ng/mL IL-6 对照组比较，阿魏酸组细胞存活率显著升高（P＜0.01），
来诱导建立p-STAT3蛋白高表达的HepG2细胞模型，详 详见表3。
见图1、表2。 3.4 阿魏酸对HepG2细胞侵袭能力的影响
3.3 阿魏酸对HepG2细胞存活率的影响 与空白对照组比较，模型组HepG2细胞侵袭数显著
与空白对照组比较，模型组细胞存活率差异无统计 增加（P＜0.01）；与模型组比较，阿魏酸组和阳性对照组
学意义（P＞0.05）；与模型组比较，阿魏酸组和阳性对照 细胞侵袭数显著减少（P＜0.01）；与阳性对照组比较，阿
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