Page 40 - 《中国药房》2021年13期
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p-STAT3                                     89 kDa


          STAT3                                      89 kDa

         caspase-3                                   35 kDa

          ZBP-89                                     89 kDa


         vimentin                                    54 kDa
                                                                  A. SH2结构域图            B.阿魏酸与1BG1对接构型图
          GAPDH                                      36 kDa
                空白对照组      模型组      阿魏酸组     阳性对照组
        图 4   阿魏酸对 HepG2 细胞中 p-STAT3、STAT3、ZBP-
              89、caspase-3和vimentin蛋白表达影响的电泳图
        Fig 4 Electrophoretogram of the effects of ferulic
               acid on protein expression of p-STAT3，
               STAT3，ZBP-89，caspase-3 and vimentin in
               HepG2 cells                                          C. 阿魏酸的羧酸基团与Asn581及Lys591相互作用图

        表 5    各 组 HepG2 细 胞 中 p-STAT3/STAT3 比 值 和             注：图5A中虚线内为STAT3的SH2结构域，红色箭头所指的棍棒
                                                            模型为磷酸化的Tyr705；图5B中黄色为阿魏酸可能的对接构型，紫色
               ZBP-89、caspase-3、vimentin 蛋白表达水平的检
                                                            为STAT3二聚体的B链
               测结果（x±±s，n＝3）                                   Note：in figure 5A SH2 domain of STAT3 is shown in the dotted
        Tab 5 Ratio of p-STAT3/STAT3 and protein expression  line，and the stick model indicated by the red arrow is phosphorylated
               of ZBP-89，caspase-3 and vimentin in HepG2    Tyr705；in figure 5B，yellow is the possible docking configuration of fe-
                                                            rulic acid，and purple is the B chain of STAT3 dimer
               cells of each group（x±±s，n＝3）
                                                                 图5   阿魏酸与STAT3蛋白的分子对接结果
         组别      p-STAT3/STAT3  caspase-3/GAPDH  ZBP-89/GAPDH  vimentin/GAPDH  Fig 5 Docking results of ferulic acid and STAT3
         空白对照组   0.770±0.002  0.704±0.136  0.762±0.097  0.933±0.118
         模型组     0.986±0.008 ＊＊  0.361±0.068 ＊＊  0.843±0.155  1.190±0.189 ＊  本研究确定以 0.5 mmol/L 阿魏酸干预 HepG2 细胞
         阿魏酸组    0.597±0.037 ##ΔΔ  0.642±0.146 #  1.166±0.127 #Δ  0.867±0.090 #Δ
         阳性对照组   0.343±0.039 ##  0.756±0.121 ##  0.771±0.060  0.656±0.054 #  48 h 的条件进行研究，且以 50 ng/mL IL-6 诱导的 p-
                            ＊
                                                     #
                                   ＊＊
            注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01；与模型组比较，P＜             STAT3 高表达 HepG2 细胞模型最佳。然后基于此进行
        0.05，P＜0.01；与阳性对照组比较，P＜0.05，P＜0.01                  后续研究发现，与空白对照组比较，模型组细胞侵袭数
                                       ΔΔ
                                 Δ
            ##
            Note：vs. blank control group， P＜0.05， ＊ ＊  P＜0.01；vs. model  显著增加，p-STAT3/STAT3比值、vimentin蛋白表达水平
                                 ＊
                                                    Δ Δ
        group，P＜0.05，P＜0.01；vs. positive control group，P＜0.05， P＜
             #
                    ##
                                             Δ
                                                            均显著升高，细胞晚期凋亡率和caspase-3蛋白表达水平
        0.01
                                                            均显著降低，表明STAT3蛋白磷酸化水平的升高可抑制
        合，作用于 gp130 蛋白，激活非受体酪氨酸激酶（JAK），                     caspase-3（而不是ZBP-89）蛋白表达，进而上调肝癌细胞
        进而磷酸化修饰 STAT3 蛋白分子；p-STAT3 以二聚体形                    中 vimentin的蛋白表达。经阿魏酸和阳性对照干预后，
        式转入细胞核，调控癌基因表达                 [4，20] 。研究表明，p-      阿魏酸组和阳性对照组细胞存活率、细胞侵袭数、
        STAT3 可通过结合 ZBP-89 或抑制 caspase-3 表达，从而              p-STAT3/STAT3 比值、vimentin 蛋白表达水平均显著降
        促进 vimentin 蛋白的表达及其在癌细胞中的作用                 [9－12] 。  低，细胞早期凋亡率（阿魏酸组除外）、晚期凋亡率、
        ZBP-89 是 vim 基因启动子区域的负调控因子，其与                       caspase-3 和 ZBP-89（阳性对照组除外）蛋白表达水平均
        p-STAT3 直接相互作用后，不仅可促进 vim 基因抗沉默                     显著升高，表明阿魏酸可能通过下调STAT3蛋白磷酸化
        子元件的作用来增强 vimentin的表达，还可减弱自身募                       水平，上调 caspase-3 蛋白表达，进而促使 vimentin 蛋白
        集组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）到vim启动子区域的能                        下调。另外分子对接的分析结果也进一步证实了阿魏
        力，从而使 vimentin 乙酰化增强，进而促进癌细胞的迁                      酸可作用于STAT3的SH2结构域，从而影响STAT3蛋白
        移 [9－10] ；凋亡关键分子caspase-3可裂解vimentin蛋白，而            的磷酸化。尽管本研究结果也证实阿魏酸可明显上调
        p-STAT3 可通过抑制 caspase-3 的表达，降低后者对 vi-               ZBP-89蛋白的表达，但与阳性对照结果不一致，提示阿
        mentin蛋白的裂解能力进而上调vimentin表达             [11－12] 。   魏酸对ZBP-89蛋白的上调可能与STAT3无关。


        ·1570 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13                                 中国药房    2021年第32卷第13期
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