Page 27 - 《中国药房》2021年12期

科大学白云娥教授鉴定为唇形科植物荆芥 S. tenuifolia 注射器 萃取相转移
Briq. 的 干 燥 地 上 部 分 ；胡 薄 荷 酮 对 照 品（批 号
中空纤维 搅拌 取20 μL
Z05J9H63054，纯度≥95％）购自上海源叶生物科技有限 转子 进样分析
萃取后纤维 萃取后样品 HPLC
公司；复方荆芥颗粒（批号分别为 20200908、20200909、 磁力搅拌器 样品相
中空纤维壁 胡薄荷酮
20200910，规格为每袋 10 g）由山西医科大学药学院实
萃取相 大分子物质
验室自制；聚偏氟乙烯中空纤维（内径 0.5 mm，孔径 0.2
图 1 HF-LPME-HPLC 法测定胡薄荷酮含量的操作流
μm）购自天津膜天膜科技股份有限公司；甲醇为色谱
程示意图
纯，其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸
Fig 1 Schematic procedure of HF-LPME-HPLC for
馏水。
content determination of pulegone
2 方法与结果
2.4 单因素实验优化HF-LPME萃取条件
2.1 溶液的制备
本研究以胡薄荷酮的富集倍数（EF，评价萃取方法
2.1.1 对照品溶液 称取胡薄荷酮对照品适量，置于
10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制得质量浓度 对 分 析 物 富 集 能 力 的 参 数）为 评 价 指 标 ，对 影 响
为 1.12 mg/mL 的对照品贮备液，4 ℃下保存，备用。临 HF-LPME 的各条件（萃取剂、样品相溶液 pH、盐种类及
[14]
用时，按照实验所需用甲醇稀释成相应质量浓度的对照 浓度、萃取时间、搅拌速度）进行单因素考察 。EF计算
品溶液。 公式为：EF＝C1/C０。式中，C1指当萃取达到平衡时萃取
2.1.2 供试品溶液 取荆芥饮片粉末（过二号筛）约0.5 剂中胡薄荷酮的质量浓度，C0指胡薄荷酮在样品相溶液
[15]
g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇10 mL，超声（功 中的初始质量浓度 ；胡薄荷酮质量浓度根据“2.6.2”项
率为 400 W）处理 20 min，然后以 8 000 r/min 离心 10 下建立的回归方程计算。
min，取上清液。沉淀物再加甲醇10 mL，同法超声处理 2.4.1 萃取剂的筛选 固定胡薄荷酮初始质量浓度为
并离心 1 次。合并 2 次上清液并转移至 25 mL 量瓶中， 0.5 µg/mL、NaCl 溶液浓度为 10％、样品相溶液 pH 为 7、
加甲醇定容，摇匀，即得供试品溶液①。精密称定复方 转速为 800 r/min、萃取时间为 30 min，其余按“2.3”项下
荆芥颗粒5.0 g，研磨后，置于具塞锥形瓶中，其余与荆芥 方法操作，分别考察不同萃取剂（正己醇、正庚醇、正辛
饮片同法操作，即得供试品溶液②。 醇、正壬醇、正癸醇）对胡薄荷酮EF的影响。结果显示，
2.1.3 基质溶液 按处方比例称取复方荆芥颗粒的辅 以正壬醇为萃取剂时所得 EF 较大，故本研究选择正壬
料（糊精和糖粉），同“2.1.2”项下“供试品溶液②”方法操 醇作为萃取剂，详见图2。
作，即得基质溶液。 100
2.2 色谱条件
色谱柱为 Hypersil C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流 75
动相为甲醇（A）-0.3％磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～8
min，60％A→65％A，8～18 min，65％A→70％A，18～ EF 50
19 min，70％A→60％A）；流速为 1.0 mL/min；检测波长
25
为252 nm；柱温为25 ℃；进样量为20 μL。
2.3 HF-LPME样品前处理方法
0
先将中空纤维剪成长约 7 cm 的小段，依次用丙酮、 正己醇 正庚醇 正辛醇 正壬醇 正癸醇
萃取剂
甲醇、水超声（功率为400 W）清洗10 min，去除纤维表面
图2 不同萃取剂对胡薄荷酮EF的影响结果
及管腔内的杂质后，于室温下自然晾干，备用。
Fig 2 Effects of different extraction solvent on EF of
按照各项实验要求取规定质量浓度的对照品溶液
pulegone
或供试品溶液70 μL，以一定浓度的盐溶液稀释至7 mL，
得到一定pH的样品相溶液。把处理好的中空纤维浸泡 2.4.2 盐种类和盐浓度的考察 固定胡薄荷酮初始质
于萃取剂中，至纤维壁孔充满萃取剂后，取出，擦去纤维 量浓度为 0.5 µg/mL、盐浓度为 10％、样品相溶液 pH 为
外表面多余的萃取剂，并用萃取剂将管腔注满，两端封 7、萃取剂为正壬醇、转速为 800 r/min、萃取时间为 30
口，弯成“U”型，然后浸入上述样品相溶液中，于室温下 min，其余按“2.3”项下方法操作，分别考察不同盐种类
以一定转速搅拌萃取一定时间。萃取结束后，将纤维管 （NaCl、KCl、CaCl2、BaCl2、Na2SO4 ）对胡薄荷酮 EF 的影
内的萃取剂转移到 EP 管中，用甲醇 40 μL 冲洗纤维内 响。结果显示，当样品相溶液中加入NaCl溶液时，盐析
壁，将冲洗液与 EP 管中的萃取剂合并，涡旋 30 s，混匀 效应较强，EF最大。在此基础上，固定其他条件不变，进
后，按“2.2”项下色谱条件进样分析。HF-LPME-HPLC 一步考察NaCl不同浓度（0、5％、10％、15％、20％）对EF
法测定胡薄荷酮含量的操作流程示意图见图1。 的影响。结果显示，随着NaCl浓度的增加，EF呈现出先

中国药房 2021年第32卷第12期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 12 ·1429 ·