Page 31 - 《中国药房》2021年12期

1.5％～4.1％（n＝3）。结果表明，该方法精密度良好。
2.6.5 稳定性试验 分别按“2.1.2”项下方法制备一批
供试品溶液①（批号 20170524）和供试品溶液②（批号
20200908），于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时，根据
“2.5.4”项下最优萃取条件，分别按“2.3”项下步骤操作并
分析测定，记录色谱图。结果显示，供试品溶液①和供
试品溶液②中胡薄荷酮峰面积的 RSD 分别为 4.6％、
7.2％（n＝6），表明两种供试品溶液在室温下放置24 h内
稳定性良好。
2.6.6 重复性试验 称取荆芥饮片（批号 20170524）和
复方荆芥颗粒（批号20200908）适量，按“2.1.2”项下方法
制备供试品溶液①和供试品溶液②，每个样品均制备 6
份，根据“2.5.4”项下最优萃取条件，分别按“2.3”项下步
骤操作并进样分析，记录峰面积并代入回归方程计算胡
薄荷酮含量。结果显示，供试品溶液①和供试品溶液②
中胡薄荷酮含量的 RSD 分别为 3.7％、5.8％（n＝6），表
明该方法的重复性较好。
2.6.7 加样回收率试验 分别精密量取已知含量的供
试品溶液①（批号 20170524）和供试品溶液②（批号
20200908）各 35 µL，按已知成分含量的 50％、100％、
150％加入相应质量浓度的胡薄荷酮对照品溶液，每个
质量浓度平行 3 份。根据“2.5.4”项下最优萃取条件，分
别按“2.3”项下步骤操作并进样分析，记录峰面积，并计
算加样回收率。结果显示，荆芥饮片低、中、高质量浓度
供试品溶液中胡薄荷酮的平均加样回收率分别为
105.1％、102.6％、102.7％，RSD≤4.1％（n＝3）；复方荆
芥颗粒低、中、高质量浓度供试品溶液中胡薄荷酮的平
均加样回收率分别为 97.2％、98.6％、102.3％，RSD≤
6.2％（n＝3），说明该方法准确度较好，详见表4。
表4 胡薄荷酮含量测定的加样回收率试验结果（n＝3）
Tab 4 Results of recovery tests of content determina-
tion of pulegone（n＝3）
样品中含量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回收率， RSD，
分析样品
μg μg μg ％ ％
荆芥饮片 0.64 0.33 0.99 106.1
0.64 0.33 0.99 106.1
0.64 0.33 0.98 103.0
0.64 0.65 1.31 103.1
0.64 0.65 1.28 98.5
0.64 0.65 1.33 106.2
0.64 0.98 1.60 98.0
0.64 0.98 1.68 106.1
0.64 0.98 1.66 104.1
复方荆芥颗粒 0.47 0.24 0.71 100.0
0.47 0.24 0.69 91.7
0.47 0.24 0.71 100.0
0.47 0.47 0.93 97.9
0.47 0.47 0.92 95.7
0.47 0.47 0.95 102.1
0.47 0.71 1.24 108.5
0.47 0.71 1.20 102.8
0.47 0.71 1.15 95.8
中国药房 2021年第32卷第12期
2.6.8 样品含量测定 精密称取3批荆芥饮片和复方荆
芥颗粒适量，分别按“2.1.2”项下方法制备3批供试品溶
液①和供试品溶液②，根据“2.5.4”项下最优萃取条件，
按“2.3”项下步骤操作并进样分析，记录峰面积并代入回
归方程计算出各样品中胡薄荷酮含量。结果显示，3 批
荆芥饮片和复方荆芥颗粒中胡薄荷酮的平均含量分别
为0.87、0.063 mg/g，RSD分别为5.5％、8.0％（n＝3）。
2.7 方法可行性评价
为进一步验证方法的可行性，笔者分别采用2020年
版《中国药典》（一部）（后文简称“药典”）荆芥项下的
HPLC 法和本研究建立的 HF-LPME-HPLC 法对荆芥饮
片（批号20170524）中胡薄荷酮的含量进行测定 。结果
[1]
显示，采用药典方法和本研究建立方法测得荆芥饮片中
胡薄荷酮的平均含量分别为 0.84 mg/g（RSD＝4.3％，
n＝3）和0.87 mg/g（RSD＝5.5％，n＝3）。采用SPSS 20.0
软件经 t 检验分析可知，两种方法测定结果在 95％置信
区间内差异无统计学意义（P＝0.374＞0.05），表明本研
究建立的方法可行，测定结果可靠。
3 讨论
本研究建立了基于 HF-LPME-HPLC 的胡薄荷酮含
量测定方法，实现了对荆芥饮片及其复方制剂中胡薄荷
酮的浓集与纯化。HF-LPME 的作用机制为：聚偏氟乙
烯中空纤维结构中的多个氟原子具有强电负性，易于形
成偶极大分子；胡薄荷酮结构中因羰基氧的电负性较
强，故而羰基碳带有部分正电性，易形成偶极分子。因
此，两个分子可通过偶极-偶极静电作用形成过渡状态
的复合物；抑或通过氟原子的富电子性，与胡薄荷酮结
构中的羰基和双键共轭结构缺电子的部分形成电荷转
移超分子，从而使样品相中的胡薄荷酮富集于中空纤维
[16]
表面，最终实现浓集 。此外，中空纤维的壁孔（0.2 μm）
起到了良好的滤过与纯化作用，使得经该方法萃取后的
溶液可直接进行HPLC分析，无需再进行滤过操作。
HF-LPME方法浓缩与富集的过程是将目标分析物
％
105.1 1.7 从样品相溶液迁移到纤维壁孔内的萃取剂中，然后再转
移到纤维腔内的接受相中 。萃取剂是影响萃取结果
[15]
102.6 3.8 的关键因素，本研究发现胡薄荷酮可较好地溶解于正壬
醇中，且正壬醇与纤维有良好的亲和力且不溶于水，加
之黏度适当，从而避免了萃取过程中试剂的扩散和挥
102.7 4.1 发 。同时，在单因素实验基础上，本研究采用中心组
[17]
合设计-响应面法对萃取条件进行了进一步优化。结果
97.2 4.9 显示，萃取时间是影响萃取的重要因素，当萃取时间为
36 min 时，样品相溶液与萃取相达到分配平衡；适当的
98.6 3.3 盐种类和盐浓度（NaCl浓度为11％）可以降低胡薄荷酮
在水相中的溶解度，促进其进入有机相，进而被较好地
萃取；在萃取过程中采用 800 r/min 的速度进行搅拌，可
102.3 6.2
[18]
缩短分配平衡时间、提高萃取效率 。笔者将本研究建
立的 HF-LPME-HPLC 法与药典荆芥项下 HPLC 法进行
China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 12 ·1433 ·