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Akt 56 kDa 表 4 加入抑制剂后各组细胞中 Akt 蛋白和 ERK1/2 蛋
白磷酸化水平的测定结果（x±±s，n＝3）
p-Akt 56 kDa
Tab 4 Phosphorylation level of Akt protein and
ERK1/2 protein in H9c2 cardiomyocytes of
ERK1/2 44 kDa
each group after treated with inhibitors（x±±s，
p-ERK1/2 44 kDa
n＝3）
HIF-1α 92 kDa 组别 p-Akt/Akt p-ERK1/2/ERK1/2
正常对照组 2.54±0.19 0.93±0.08
β-actin 42 kDa 模型组 0.88±0.08 ＊＊ 0.48±0.12 ＊
荭草花提取物组 1.51±0.15 ## 0.68±0.08 #
正常对照组 模型组 荭草花提取 荭草花提取 荭草花提取
物低浓度组 物中浓度组 物高浓度组 LY+荭草花提取物组 1.05±0.10 @@
图 6 荭草花提取物对缺氧复氧损伤 H9c2 心肌细胞中 PD+荭草花提取物组 0.53±0.06 @
＊＊
#
##
RISK 信号通路以及 HIF-1α蛋白表达影响的电 注：与正常对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜
0.01；与荭草提取物组比较，P＜0.05， P＜0.01
@@
@
泳图
Note：vs. normal control group， P＜0.01；vs. model group，P＜
＊ ＊
#
Fig 6 Electrophoretogram of the effects of P. orientale 0.05，P＜0.01；vs. P. orientale flower extract group，P＜0.05， P＜
@@
##
@
flower extract on RISK signaling pathway and 0.01
HIF-1α protein expression in H9c2 cardiomyo- 上述ATP酶活性显著升高，钙离子水平（细胞质中）显著
cytes with hypoxia-reoxygenation injury 降低。这表明荭草花提取物可通过提高ATP酶活性，维
持心肌细胞中正常的物质运送、能量转换和信息传递等
Akt 56 kDa
生物学功能，从而逆转心肌细胞中钙离子水平的升高，
最终发挥保护心肌细胞的作用。
p-Akt 56 kDa
线粒体通透性转换孔的打开会导致膜电位去极化、
正常对照组 模型组 荭草花提取 LY+荭草花提
物组 取物低浓度组 释放凋亡因子和降低氧化磷酸化水平 ，因此测定MMP
[26]
A.加入抑制剂LY
可评价线粒体的功能。本研究发现，缺血缺氧损伤H9c2
ERK1/2 44 kDa 心肌细胞MMP显著升高，经荭草花提取物干预后，细胞
MMP 显著降低，这表明荭草花提取物可通过保护线粒
p-ERK1/2 44 kDa
体，改善H9c2心肌细胞的缺血缺氧损伤。
正常对照组 模型组 荭草花提取 PD+荭草花提 相关研究发现，当线粒体的功能失调时，可释放
物组 取物低浓度组
[9]
B.加入抑制剂PD Cyto c进入细胞质，激活级联凋亡反应 ，进而激活线粒
[6]
图 7 加入抑制剂后荭草花提取物对缺氧复氧损伤 体的重构 ，最终导致细胞的凋亡和坏死。本研究发现，
H9c2 心肌细胞中 RISK 信号通路蛋白表达影响 缺血缺氧损伤H9c2心肌细胞的细胞质中Cyto c/线粒体
的电泳图 中 Cyto c 比值显著升高；经荭草花提取物干预后，上述
Fig 7 Electrophoretogram of the effects of P. orientale 指标比值显著降低。这表明荭草花提取物可通过降低
flower extract on RISK signaling pathway in 缺血缺氧损伤 H9c2 心肌细胞线粒体膜的开放程度，改
善其缺氧复氧损伤。
H9c2 cardiomyocytes with hypoxia-reoxygena-
tion injury after treated with inhibitors RISK信号通路是机体对抗心肌缺血再灌注的最重
[27]
要的通路之一 。当心肌细胞受到缺氧复氧刺激时，多
显著升高；经荭草花提取物干预后，细胞中 ROS 水平显
种内源性和外源性物质会依赖于RISK途径发挥保护细
著降低。这表明荭草花提取物可通过提高细胞清除 胞的作用 。本研究发现，经荭草花提取物干预后，缺
[28]
ROS的能力，从而发挥抗缺氧复氧损伤的作用。 氧复氧损伤H9c2心肌细胞中Akt蛋白和ERK蛋白的磷
ATP酶是存在于生物膜上的一种蛋白酶，具有物质 酸化水平均显著升高；使用Akt蛋白和ERK蛋白的抑制
运送、能量转换和信息传递等生物学功能；机体在缺氧 剂分别处理后，细胞中Akt蛋白和ERK蛋白的磷酸化水
刺激下，心肌细胞会迅速由有氧代谢转为无氧糖酵解， 平均显著降低，说明荭草花提取物对Akt蛋白和ERK蛋
使细胞中ATP耗竭，进一步引起一系列的代谢紊乱和异 白的激活作用被阻断，证实了其可能是通过 RISK 信号
常，从而使得依靠 ATP 转运的相关 ATP 酶活性降低，进 通路对缺氧复氧损伤的心肌细胞发挥保护作用。
而导致细胞内外离子交换出现异常，引起细胞内钙离子 当HIF-1α在机体常氧条件下保持稳定水平时，具有
超载 。本研究发现，缺血缺氧损伤 H9c2 心肌细胞中 保护心肌缺血再灌注的作用，但是，当其过度表达时，可
[25]
+
2+
2+
[29]
Na -K -ATP 酶和 Ca -Mg -ATP 酶活性显著降低，钙离 能会导致心脏损伤 。本研究发现，缺氧复氧损伤H9c2
+
子水平（细胞质中）显著升高；经荭草花提取物干预后， 心肌细胞中HIF-1α的蛋白表达水平显著升高；经荭草花
·1310 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11 中国药房 2021年第32卷第11期