Page 30 - 中国药房2021年11期

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的改善作用 Δ

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李月婷 ，刘 亭 ，吴 琼 ，陆定艳 ，王明金 ，王永林 ，李勇军 ，周 孟 ，刘春花 （1.贵州医科大学贵州省药
物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室，贵阳 550004；2.贵州医科大学民族药与中
药开发应用教育部工程研究中心，贵阳 550004；3.贵州医科大学药学院，贵阳 550004）
中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）11-1304-09
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.11.05
摘 要 目的：研究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的的改善作用及机制。方法：将H9c2心肌细胞为正常对照组、
模型组和荭草花提取物低、中、高浓度组（20、40、80 μg/mL），除正常对照组外，其余各组细胞以800 μmol/L CoCl2复制缺氧复氧损
伤模型，然后观察细胞凋亡情况，并分别检测细胞中 ROS 水平、钙离子水平（细胞质中）、线粒体膜电位（MMP）水平、ATP 酶
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（Na -K -ATP酶、Ca -Mg -ATP酶）活性、细胞质中细胞色素c（Cyto c）/线粒体中Cyto c比值、再灌注补救激酶（RISK）信号通路相
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关蛋白[蛋白激酶B（Akt）、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）]的磷酸化水平以及缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的蛋白表达水平。另
取细胞分为正常对照组、模型组、荭草花提取物组（80 μg/mL）、磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）抑制剂 LY294002+CoCl2组（15 μmol/L
LY294002+800 μmol/L CoCl2 ）、LY294002+荭草花提取物组（15 μmol/L LY294002+80 μg/mL荭草花提取物）、丝裂原活化蛋白激酶
激酶（MEK）抑制剂PD98059+CoCl2组（25 μmol/L PD98059+800 μmol/L CoCl2 ）、PD98059+荭草花提取物组（25 μmol/L PD98059+
80 μg/mL荭草花提取物），同法培养后，测定细胞中Akt蛋白和ERK1/2蛋白的磷酸化水平，以验证荭草花提取物对RISK信号通路
的激活作用。结果：与模型组比较，荭草花提取物各浓度组细胞的细胞核固缩现象减轻，凋亡小体数量减少；细胞中ROS水平、钙
离子水平（低浓度组除外）、MMP、细胞质中Cyto c/线粒体中Cyto c比值和HIF-1α的蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；
ATP酶活性（低浓度组除外）、Akt蛋白和ERK1/2蛋白磷酸化水平均显著升高（P＜0.01）。加入抑制剂LY294002、PD98059后，细
胞中Akt蛋白和ERK1/2蛋白磷酸化水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论：荭草花提取物可改善H9c2心肌细胞缺氧复氧
损伤，其作用机制可能与抑制心肌细胞凋亡、提高ATP酶活性、保护线粒体、调节RISK信号通路相关蛋白和HIF-1α蛋白表达有关。
关键词 荭草花提取物；H9c2心肌细胞；缺氧复氧损伤；补救激酶信号通路；缺氧诱导因子1α

Study on Improvement Effects of Polygonum orientale Flower Extract on Hypoxia-reoxygenation Injury of
H9c2 Cardiomyocytes
LI Yueting ，LIU Ting ，WU Qiong ，LU Dingyan ，WANG Mingjin ，WANG Yonglin ，LI Yongjun ，ZHOU
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Meng ，LIU Chunhua （1. Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics/State Key Laboratory of
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Functions and Applications of Medicinal Plants， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China；
2. Engineering Research Center of the Ministry of Education for the Development and Application of Ethnic
Medicine and TCM，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，China；3. School of Pharmacy，Guizhou
Medical University，Guiyang 550004，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the improvement effects and mechanism of Polygonum orientale flower extract on hypoxia-
reoxygenation injury of H9c2 cardiomyocytes. METHODS：H9c2 cardiomyocytes were divided into normal control group，model
group and low-，medium- and high-concentrations groups of P. orientale flower extract（20，40，80 μg/mL）. Except for normal
control group，other groups were given 800 μmol/L CoCl 2 to induce hypoxia-reoxygenation injury model. Cell apoptosis was observed.
The levels of Ca （in cytoplasm），mitochondrial membrane potential（MMP），ATP enzyme（Na -K -ATP enzyme，Ca -Mg -ATP
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enzyme） activities， the ratio of cytochrome c（Cyto c）
Δ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目（No.81803700， protein in cytosol to mitochondria，phosphorylation levels of
No.81560630，No.81660570，No.U1812403）；中央引导地方科技发展专 reperfusion injury salvage kinase （RISK） signaling pathway
项（No.黔科中引地〔2018〕4006）；贵州省科技计划项目（No.黔科合基 related protein [protein kinase B（Akt）and extracellular signal
础〔2020〕1Z068 号，No.黔科合基础〔2019〕1439 号，No.黔科合基础
regulated kinase 1/2（ERK1/2）] as well as protein expression
〔2019〕1280号）
of HIF-1 α were detected respectively. In addition，the cells
＊副教授，博士。研究方向：中药药效物质基础及作用机制。电
were divided into normal control group，model group and P.
话：0851-86908468。E-mail：nhwslyt@163.com
# 通信作者：副教授，博士。研究方向：中药、民族药药效物质基 orientale flower extract group （80 μ g/mL），PI3K inhibitor
础及作用机制。电话：0851-86908468。E-mail：liuch2016@gmc.edu.cn LY294002 + CoCl2 group （15 μ mol/L LY294002 + 80 μ mol/L
·1304 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11 中国药房 2021年第32卷第11期