Page 32 - 《中国药房》2021年10期

2.7 RPV修饰的紫杉醇与五味子乙素脂质体体外抗肿 RPV修饰的空白脂质体组
紫杉醇与五味子乙素脂质体组
瘤作用的初步评价 120
RPV修饰的紫杉醇与五味子乙素脂质体组
2.7.1 细胞的培养 将 SK-OV-3 细胞接种于含 10％ 100
FBS 和 1％青-链霉素的 MCCOY’S 5A 完全培养基（简 ％ 80 ＊ ＊ ＊
称“完全培养基”）中，然后将其置于 37 ℃、5％CO2培养 存活率， 60 ＊ ＊# ＊# ＊ ＊
箱中孵育。待细胞生长至融合度为 90％后，弃去培养 40 ＊# ＊# ＊ ＊
20
液，加入适量 PBS 清洗细胞，再加入 0.25％胰蛋白酶 ＊#
0 ＊#
1 500 μL消化细胞，然后用移液枪轻轻吹打使细胞完全 0 1/30 1/15 1/5 1/3 8/15 4/5 1
稀释比例
脱落，将细胞悬液置于15 mL离心管中，以1 500 r/min离
＊
注：与 RPV 修饰的空白脂质体组比较，P＜0.05；与紫杉醇与五
心3 min，吸弃上清液，重新加入新鲜的完全培养基重悬 味子乙素脂质体组比较，P＜0.05
#
并转移至2个新的培养瓶中进行传代培养。本研究所用 Note：vs. RPV modified blank liposome group， P＜0.05；vs.
＊
#
为传代5～8代的细胞。 paclitaxel and schisandrin B liposomes group，P＜0.05
2.7.2 RPV 修 饰 的 紫 杉 醇 与 五 味 子 乙 素 脂 质 体 对 图 6 各组细胞存活率的测定结果（x±±s，n＝4）
SK-OV-3 细胞存活率的影响 采用磺酰罗丹明 B 染色 Fig 6 Survival rate of cells in each group（x±±s，n＝4）
法进行考察。取对数期生长的SK-OV-3细胞，用完全培 种于 6 孔板中，然后将其分为 RPV 修饰的空白脂质体
养基稀释制成密度为 1.0×10 mL 的细胞悬液，按每孔 组、紫杉醇与五味子乙素脂质体组和RPV修饰的紫杉醇
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1.5×10 个接种于 96 孔板中，并置于 37 ℃、5％CO2培养 与五味子乙素脂质体组，每组设置4个复孔。将细胞置
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箱中孵育24 h。然后将细胞分为稀释不同倍数（分别稀 于37 ℃、5％CO2培养箱中孵育12 h，待细胞长至融合度
释为最优处方工艺最大量的4/5、8/15、1/3、1/5、1/15、1/30， 达到 80％后，用 10 μL 枪头在每孔中间画 3 条平行线。
浓度根据前期预实验设置）的 RPV 修饰的空白脂质体 以PBS冲洗掉划痕中间死亡的细胞，加入新鲜的完全培
组、紫杉醇与五味子乙素脂质体组和RPV修饰的紫杉醇 养基，并分别加入相应脂质体各 200 μL（将处方稀释 5
与五味子乙素脂质体组，每组设置4个复孔。加药后继 倍，即脂质体中紫杉醇浓度为 3 μmol/L，紫杉醇与五味
续孵育 48 h，吸弃培养液，细胞用 10％三氯乙酸溶液在 子乙素摩尔比为1∶5，浓度根据前期预实验确定）。分别
4 ℃条件下固定1 h，用水冲洗3次。待孔板内完全干燥 于给药培养 0、24 h 时拍照，用 Image J 1.48 软件测定划
后，每孔加0.4％磺酰罗丹明B溶液150 μL染色30 min， 痕区域面积，并计算细胞迁移抑制率：迁移抑制率
用 1％乙酸溶液冲洗 4 次；室温干燥后，每孔加入 10 （％）＝（1－S24 h/S0 h ）×100％（式中，S24 h为给药24 h时的划
mmol/L 的 Tris 碱溶液（pH 10.5）200 μL，振荡 1 h 加速染 痕面积，S0 h为给药0 h时的划痕面积）。按“2.7.2”项下方
料的溶解，然后使用酶标仪于540 nm波长下测定各孔的 法进行统计分析。各组细胞的划痕面积测定结果见
光密度（OD）值，并计算细胞存活率：细胞存活率（％）＝ 图7。
结果显示，3 种脂质体对 SK-OV-3 细胞迁移能力的
ODn/OD0×100％（式中，ODn为实验组细胞的OD值，OD0
为 RPV 修饰的空白脂质体组细胞的 OD 值）。使用 抑制作用大小为 RPV 修饰的紫杉醇与五味子乙素脂质
Graphpad-prism-5软件计算药物的半数抑制浓度（IC50 ）。 体＞紫杉醇与五味子乙素脂质体＞RPV 修饰的空白脂
实验重复 3 次。采用 SPSS 18.0 软件进行单因素方差分 质体。与RPV修饰的空白脂质体组[细胞迁移抑制率为
析和 LSD 检验，P＜0.05 表示差异具有统计学意义。各 （1.12±0.14）％]比较，紫杉醇与五味子乙素脂质体组、
组细胞存活率的测定结果见图6。 RPV 修饰的紫杉醇与五味子乙素脂质体组的细胞迁移
结果显示，RPV 修饰的紫杉醇与五味子乙素脂 抑制率[分别为（15.79±1.28）％、（86.41±2.05）％]均显
著升高（P＜0.05）；且 RPV 修饰的紫杉醇与五味子乙素
质体对SK-OV-3细胞的毒性最强[细胞存活率最低，IC50
为（2.93±0.56）μmol/L]，其次为紫杉醇与五味子乙素脂 脂质体组细胞的迁移抑制率显著高于紫杉醇与五味子
质体[IC50为（4.21±0.43）μmol/L]，RPV修饰的空白脂质 乙素脂质体组（P＜0.05）。
体几乎没有毒性。与紫杉醇与五味子乙素脂质体组比 2.7.4 RPV 修 饰 的 紫 杉 醇 与 五 味 子 乙 素 脂 质 体 对
较，RPV 修饰的紫杉醇与五味子乙素脂质体组的 IC50显 SK-OV-3 细胞侵袭能力的影响 采用 Transwell 小室侵
著降低（P＜0.05）。以上结果提示，RPV 的修饰使脂质 袭实验进行考察。取对数期生长的SK-OV-3细胞，以无
体对肿瘤细胞的抑制作用较普通脂质体有所增强。 血清的 MCCOY’S 5A 培养液稀释制成密度为 3×10 4
2.7.3 RPV 修 饰 的 紫 杉 醇 与 五 味 子 乙 素 脂 质 体 对 mL 的细胞悬液，按每孔 1.5×10 个接种于 Transwell 小
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SK-OV-3 细胞迁移能力的影响 采用划痕实验进行考 室的上室中。于上室中分别加入 RPV 修饰的空白脂质
察。取对数期生长的SK-OV-3细胞，以完全培养基稀释 体、紫杉醇与五味子乙素脂质体及RPV修饰的紫杉醇与
制成密度为 1×10 mL 的细胞悬液，按每孔 2×10 个接 五味子乙素脂质体各 20 μL（脂质体中紫杉醇浓度为 15
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