Page 28 - 《中国药房》2021年10期
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卵巢癌作为妇科生殖系统的三大恶性肿瘤之一，致 展舒生物科技有限公司；RPV（纯度＞95％）购自上海吉
死率较高，目前临床上常采用紫杉醇相关制剂进行治 尔生化有限公司；卵磷脂购自日本 NOF 公司；胎牛血清
疗 。紫杉醇是从红豆杉树皮中分离得到的一种二萜类 （FBS）购自浙江天杭生物科技有限公司；MCCOY’S 5A
[1]
生物碱，为一种广谱抗癌药，常用于治疗卵巢癌、乳腺 培养基、pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS，批号1022Q021）、
癌、肺癌、胃癌、食管癌以及头颈部癌等 [2－5] 。但紫杉醇 葡聚糖凝胶Sephadex G-50（粒径120 µm）均购自北京索
对肿瘤细胞缺乏选择性，在肿瘤部位的浓度较低、副作 莱宝科技有限公司；胰蛋白酶购自美国Gibco公司；其余
用较大，其临床应用受到了一定的限制 [6－7] 。五味子乙 试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯净水。
素作为中药五味子的主要成分之一，具有抗氧化、抗肿 1.3 细胞
瘤、保肝等多种药理活性，可通过抑制多种肿瘤细胞的增 人卵巢癌细胞 SK-OV-3 购自中国医学科学院基础
殖、诱导其凋亡，进而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移 [8－10] 。 医学研究所。
据相关研究报道，将五味子乙素与紫杉醇联用后，五味 2 方法与结果
子乙素可起到辅助作用，增强抗肿瘤药物紫杉醇的活性 2.1 脂质体的制备
并降低其副作用 。 采用薄膜分散法进行制备。精密称取处方量的
[11]
脂质体是由胆固醇和磷脂构成的球型微囊结构的 RPV、卵磷脂、胆固醇和紫杉醇、五味子乙素对照品，加
药物载体，在其表面修饰靶向配体后即能够选择性地将 三氯甲烷5 mL，超声（功率200 W，频率40 kHz，下同）处
包埋的药物浓集定位于靶组织、靶器官或靶细胞，且靶 理 3 min，然后在 40 ℃水浴中减压蒸发除去三氯甲烷，
向脂质体相比与普通脂质体具有毒性低、靶向性强等优 使圆底烧瓶内壁形成一层薄膜。将得到的薄膜用 PBS
点 [12－13] 。细胞穿膜肽是一类由 10～30 个氨基酸残基组 5 mL超声处理5 min使溶解，然后将此混悬液置于EP管
成的能穿透细胞膜的短链多肽，其中富含碱性氨基酸， 中，以探头超声 10 min 后，用微孔滤膜（0.22 µm）滤过 2
能够与多种药物分子结合并将药物递送至肿瘤细胞内， 次，取滤液，即可得到 RPV 修饰的紫杉醇与五味子乙素
[14]
以达到增强疗效的目的，是一种有效的载体工具 。而 脂质体。除不加入紫杉醇和五味子乙素外，其余步骤同
RPV 肽（氨基酸组成为精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-脯氨 前，制备RPV修饰的空白脂质体。除不加入RPV外，其
酸-苯丙氨酸-缬氨酸-酪氨酸-亮氨酸-异亮氨酸）是一种 余步骤同前，制备紫杉醇与五味子乙素脂质体。
新型的小分子细胞穿膜肽，与普通细胞穿膜肽相比，其 2.2 紫杉醇含量测定方法的建立
[15]
能更好地促进肿瘤细胞对药物的摄取 ，为卵巢癌的治 采用HPLC法进行测定。
疗带来了新的希望。鉴于此，本研究拟制备一种RPV修 2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent ZORBAX SB-Aq
饰的紫杉醇与五味子乙素脂质体，并初步考察其对人卵 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈-甲醇-水
巢癌细胞SK-OV-3侵袭和转移的抑制作用，为其后续抗 （42 ∶ 28 ∶ 30，V/V/V）；检测器为紫外吸收检测器，检测波
卵巢癌研究提供参考。 长为 227 nm；柱温为 30 ℃；流速为 1 mL/min；进样量为
1 材料 10 μL。
1.1 主要仪器 2.2.2 溶液的制备 （1）对照品溶液：称取紫杉醇对照
本研究使用的主要仪器有HBS-1096A型酶标仪（南 品10 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，混匀，即得到
京德铁实验设备有限公司）、FA1004 型电子天平（上海 质量浓度为1 mg/mL的对照品母液。以甲醇为溶剂，将
越平科学仪器有限公司）、T1-S 型倒置荧光显微镜（日 上述对照品母液稀释后制成质量浓度分别为 60、80、
本 Nikon 公司）、DZKW-S-4 型电热恒温水浴锅（北京市 100、120、140、160、180、200 μg/mL 的系列对照品溶液。
永光明医疗仪器有限公司）、RE52CS 型旋转蒸发器（上 （2）供试品溶液：精密吸取 RPV 修饰的紫杉醇与五味子
海亚荣生化仪器厂）、SG3300H型超声波清洗器（上海冠 乙素脂质体1 mL，加甲醇9 mL，混匀，超声处理2 min破
特超声仪器公司）、JY92-2D型超声波细胞捣碎机（宁波 乳后，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。（3）
新 芝 生 物 股 份 有 限 公 司）、20AT 型 高 效 液 相 色 谱 空白溶液：精密吸取RPV修饰的空白脂质体1 mL，同供
（HPLC）仪（日本 Shimadzu 公司）、JEM-1200EX 型透射 试品溶液制备方法进行操作，即得。
电子显微镜（日本JEOL公司）、ZS90型激光散射粒径测 2.2.3 专属性试验 分别取供试品溶液、对照品溶液
定仪（英国Malvern公司）、WJ-80B-Ⅱ型CO2细胞培养箱 （200 μg/mL）、空白溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件进
（上海新苗医疗器械制造有限公司）。 样测定，记录色谱图。结果显示，紫杉醇在6.5～6.6 min
1.2 主要药品与试剂 出峰，而空白溶液在对应时间段无色谱峰出现；待测成
紫杉醇对照品（批号J1101A，纯度＞99％）、胆固醇、 分峰与相邻色谱峰间的分离度均大于 1.5，且主峰与杂
磺酰罗丹明B均购自大连美仑生物技术有限公司；五味 质峰均能达到基线分离，提示本方法专属性良好，详见
子乙素对照品（批号 201805793，纯度＞99％）购自湖州 图1。
·1174 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10 中国药房 2021年第32卷第10期
