Page 63 - 《中国药房》2021年8期

DMSO），ST group（20 μmol/L），ST+NSC228155 group [20 μmol/L ST+100 μmol/L NSC228155（EGFR agonist）] and ST+SC79
group [20 μmol/L ST+20 μmol/L SC79（PI3K/Akt agonist）]. The proliferation，migration and invasion ability of SCL-1 cells in
each group were detected by CCK-8 assay，scratch test and Transwell chamber invasion assay. The expression of epidermal growth
factor receptor（EGFR），phosphatidylinositol 3 kinase（PI3K），phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase（p-PI3k），protein
kinase B （Akt） and phosphorylated protein Akt （p-Akt） protein of cells in blank control group and ST different concentration
groups（5，10，20 μmol/L）were determined by Western blot assay so as to validate the relationship between ST effect and EGFR/
PI3K/Akt signaling pathway. SCL-1 cells and human normal skin fibroblasts cell WS1 were divided into blank control group（0.1％
DMSO），ST group（20 μmol//L），ZD1839 group（positive control，20 μmol//L，EGFR inhibitor）and LY294002 group（positive
control，20 μ mol//L，PI3K/Akt inhibitor）. CCK-8 assay was used to detect the cell proliferation in order to evaluate the cells
cytotoxicity of ST. RESULTS：Compared with blank control group，the proliferation，migration and invasion ability of SCL-1 cells
were significantly decreased in 5，10，20 μmol/L ST groups（P＜0.05）. Western blot and immunofluorescence assay showed that
the expression of N-cadherin in SCL-1 cells were decreased significantly in 5，10，20 μmol/L ST groups（P＜0.05），while the
protein expression of E-cadherin was increased significantly（P＜0.05）；the protein expressions of EGFR，p-PI3K and p-Akt were
significantly decreased（P＜0.05）. Compared with ST group，the proliferation，migration and invasion ability of SCL-1 cells were
increased significantly in ST + NSC228155 group and ST + SC79 group （P＜0.05）. Compared with blank control group，the
proliferation ability of WS1 cells had no significant change in ST group，while the proliferation ability of SCL-1 cells was
decreased significantly（P＜0.05）；the proliferation ability of the two kinds of cells were decreased significantly in ZD1839 group
and LY294002 group（P＜0.05）. Compared with ST group，the proliferation ability of WS1 cells was decreased significantly in
ZD1839 group and LY294002 group（P＜0.05），but there was no significant difference in the proliferation ability of SCL-1 cells
（P＞0.05）. CONCLUSIONS：ST may inhibit the proliferation，EMT and metastasis of SCL-1 cells through inhibiting the
activation of EGFR/PI3K/Akt signaling pathway，and its side effects are few.
KEYWORDS Sinapine thiocyanate； Human cutaneous squamous cell carcinoma SCL-1 cells； Proliferation； Epithelial
mesechymal transition；Metastasis；EGFR/PI3K/Akt signaling pathway

皮肤鳞状细胞癌多为表皮肿瘤，常采用手术方法进 响，并从EGFR/PI3K/Akt信号通路出发初步分析其分子
行治疗，但治疗后容易复发和转移；复发后，多采用放化 作用机制，为 ST 药用价值的进一步开发以及将其用于
疗方法进行治疗，治疗风险较高 [1－2] 。因此，寻找一种安 临床治疗皮肤鳞状细胞癌提供可行的参考依据。
全的新型药物对于治疗复发和转移性皮肤鳞状细胞癌 1 材料
较为重要。皮肤鳞状细胞癌易发生远处转移，其中上皮 1.1 主要仪器
[3]
间质转换（EMT）是其转移的重要机制之一 。EMT 是 HHM-SY96S型多功能酶标仪购自深圳恒美生物科
细胞由上皮表型转化为间质表型的过程，其与多种细胞 技有限公司；54-03003 型倒置光学显微镜购自德国
生物的正常胚胎发育相关，但同时也与肿瘤的发生发展 Bresser 公 司 ；GelDoc XR 型 凝 胶 成 像 仪 购 自 美 国
[4]
相关 。在皮肤鳞状细胞癌的发展过程中，原柱状的正 Bio-Rad 公司；LV100ND 型荧光显微镜购自日本 Nikon
常上皮细胞会逐渐变为梭形的间质细胞，此时上皮细胞 公司；DYCP-31DN型电泳仪、DYCZ-40D型转膜仪均购
的极性消失，失去了原本与基底膜连接的上皮表型特 自北京六一生物科技有限公司；D-650 型水平细胞超净
[5]
征，从而获得迁移、侵袭、抗凋亡等间质表型功能 。 工作台购自江苏常州如益科技有限公司；303-5B型二氧
表皮生长因子受体（EGFR）是细胞增殖、发育所必 化碳培养箱购自上海尚仪生物科技有限公司。
[6]
需的受体 。当表皮生长因子与其配体在细胞外结合后 1.2 主要药品与试剂
形成二聚体，此二聚体可使细胞内酪氨酸发生磷酸化并 ST 原料药（批号 7431-77-8，纯度＞98％）购自成都
激活下游细胞内的信号级联，激活磷脂酰肌醇 3 激酶 仪睿生物科技有限公司；EGFR 激动剂 NSC228155、
[7]
（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）途径 ，而该途径与癌细胞的增 PI3K/Akt 激动剂 SC79、EGFR 抑制剂 ZD1839 和 PI3K/
[8]
殖、迁移和侵袭等恶性行为密切相关 。 Akt 抑 制 剂 LY294002（批 号 分 别 为 HY-101084、HY-
芥子碱硫氰酸盐（ST）是从十字花科药用植物中提 18749、HY-50895、HY-10108，纯度均大于 99％）均购自
取得到的一种木脂素类化合物，具有抗炎、抗衰老、抗氧 美国 MCE 公司；RPMI 1640 培养基、胎牛血清（FBS）、
化、抗肿瘤等多种药理作用 ，具有较大的开发价值。有 0.25％胰蛋白酶[含乙二胺四乙酸（EDTA）]溶液均购自
[9]
报道指出，ST能够抑制小鼠的血脂血糖升高、动脉粥样 美国Gibco公司；CCK-8试剂盒（批号BS350A）购自上海
硬化和肝细胞脂肪变性 [10－11] ；此外，ST 对肝癌细胞的增 白鲨生物科技有限公司；Transwell小室（批号30419069）
[12]
殖和转移有抑制作用 。然而，ST对皮肤鳞状细胞癌的 购自美国Corning公司；Matrigel胶（批号2446ML005）购
影响及作用机制尚不清楚。因此，本研究拟探讨 ST 对 自德国Biofroxx公司；苯甲基磺酰氟（PMSF）、RIPA裂解
人皮肤鳞状细胞癌 SCL-1 细胞增殖、EMC 和转移的影 液均购自福州飞净生物科技有限公司；十二烷基硫酸

中国药房 2021年第32卷第8期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8 ·953 ·